讨论

火云豹

在培养肿瘤干细胞的时候  培养基中要加入胰岛素 大家都是怎么溶解的呢

火云豹

大家各抒己见 结合现有情况实践中

haijunlv2004

1ml冰乙酸加到100ml双蒸水里制成酸化水，100 mg Insulin 用27ml 酸化水溶解，浓度约为100U/ml，过滤除菌，分装成1ml/EP管，-20℃保存。
/ r$ P0 C* O3 r2 E用时先将1ml的储存液溶于5ml Hepes 中，再加入到500ml 培养基，终浓度约为0.2U/ml。0 b" \3 L+ Y- F" Y1 `0 b
切勿直接将1ml储存液加入500ml培养基，会导致无法溶解。

ambassador

回复  ambassador
1 {+ @9 }/ M) u" D- D1 @9 Q9 q用双蒸水。。。。这不会改变溶解渗透压了吗。。。细胞不都死了，PBS溶吧。。
- I/ k: |+ n/ f0 ~, P( Uangel-sakura 发表于 2010-5-25 12:31

6 @7 A2 p# G, L
2 u* X* o7 P+ N! Y  x/ \& k0 B; @7 d# l5 J
    可能我们那时没买PBS，是用胰酶与EDTA按一定比例来调节渗透压的。

angel-sakura

回复 2# ambassador # i0 r: {# w7 W( a
用双蒸水。。。。这不会改变溶解渗透压了吗。。。细胞不都死了，PBS溶吧。。

chuanbaozang

用1ml的酸化水溶解10mg胰岛素，溶解过滤分装，使用终浓度为10ug/ml。
! r/ D9 N4 F/ X+ A5 f, Y4 M酸化水是100ml中加1ml左右冰醋酸，调节pH为1.9左右，高压灭菌，冷却即可。
& R3 \. z: ?; Y- o如果在超净台中打开sigma的胰岛素原装，我个人认为可以不过滤灭菌的。& j0 m  [7 _# U0 @. W1 }
以上仅供参考。

火云豹

呵呵 我这里每次来的sigma的产品都没有附带说明书 很麻烦

daviddow

你看看sigma那里有说明，胰岛素是怎么溶解的。那里有个单子，是说各种物质的溶解方法。我就不给你找了。要是你找不到，就联系我

ambassador

& \6 `( E3 e/ H5 N8 i+ j+ D+ }; M! ]! e9 `' E
你是说加胰酶吧！
8 C8 b  ^* y0 J! v; n/ G2 \1 h# _我们以前养海拉细胞的时候，大概是这样的流程：' K. A) V2 v, x2 g# X) Y( W( a1 P& q
1.胰酶和EDTA(按一定比例，我忘了具体多少...)称好以后，  p5 m$ _  n* Q+ V# A* l1 W0 R
2.用双蒸水溶解，( _" R) d: t  H) i4 L! M
3.电磁搅拌仪搅匀，
; Y3 X( h% B0 g2 {& Y7 F$ g& ]; A3 s4.再微孔滤膜过滤