讨论

火云豹

在培养肿瘤干细胞的时候  培养基中要加入胰岛素 大家都是怎么溶解的呢

ambassador

9 R; }' m, E9 x
+ S9 B- N, J6 C% k8 O, D# A
你是说加胰酶吧！1 h9 c3 u/ S/ |, F; s
我们以前养海拉细胞的时候，大概是这样的流程：
7 ?7 `! R' u6 j- \, [; E% N. P  ~1.胰酶和EDTA(按一定比例，我忘了具体多少...)称好以后，
- P5 G6 [2 y& z4 d0 J9 \, z3 D* _2.用双蒸水溶解，
; r0 ?% P4 Z2 S# O* b! ]3.电磁搅拌仪搅匀，) u% n5 i7 D6 E
4.再微孔滤膜过滤

daviddow

你看看sigma那里有说明，胰岛素是怎么溶解的。那里有个单子，是说各种物质的溶解方法。我就不给你找了。要是你找不到，就联系我

火云豹

呵呵 我这里每次来的sigma的产品都没有附带说明书 很麻烦

chuanbaozang

用1ml的酸化水溶解10mg胰岛素，溶解过滤分装，使用终浓度为10ug/ml。$ M8 j5 e: ]4 S0 j6 T8 a
酸化水是100ml中加1ml左右冰醋酸，调节pH为1.9左右，高压灭菌，冷却即可。
. I0 u- \4 a+ y, `6 C/ i1 d7 ^如果在超净台中打开sigma的胰岛素原装，我个人认为可以不过滤灭菌的。
4 Q& ]& v: |7 U, [5 x以上仅供参考。

angel-sakura

回复 2# ambassador ( w! ?/ c' T# T- M5 {  X- I
用双蒸水。。。。这不会改变溶解渗透压了吗。。。细胞不都死了，PBS溶吧。。

ambassador

回复  ambassador ( i  l4 I1 o7 u5 V4 `
用双蒸水。。。。这不会改变溶解渗透压了吗。。。细胞不都死了，PBS溶吧。。+ ~1 }. \: C: U2 E$ O1 x! I
angel-sakura 发表于 2010-5-25 12:31

' \: I5 o5 @# H: U. u" o" L
6 \9 x) w! y7 B8 p" `# j1 o4 V% K( ~# T# b: Z, ]2 X" S3 a
    可能我们那时没买PBS，是用胰酶与EDTA按一定比例来调节渗透压的。

haijunlv2004

1ml冰乙酸加到100ml双蒸水里制成酸化水，100 mg Insulin 用27ml 酸化水溶解，浓度约为100U/ml，过滤除菌，分装成1ml/EP管，-20℃保存。
: `* {0 R. w) D: V& H# N用时先将1ml的储存液溶于5ml Hepes 中，再加入到500ml 培养基，终浓度约为0.2U/ml。
; |/ f3 J1 h4 |8 F( R# {切勿直接将1ml储存液加入500ml培养基，会导致无法溶解。

火云豹

大家各抒己见 结合现有情况实践中