讨论

火云豹

在培养肿瘤干细胞的时候  培养基中要加入胰岛素 大家都是怎么溶解的呢

ambassador

! k( Y3 A! n; n- g/ o3 g
- |8 I/ ]5 c* i3 _: p  `你是说加胰酶吧！
0 ?/ _3 R% P" {3 y我们以前养海拉细胞的时候，大概是这样的流程：
8 o0 [/ S7 A6 D. o( X  \* o1.胰酶和EDTA(按一定比例，我忘了具体多少...)称好以后，
' k4 @$ \" j/ y5 Z7 m. r2.用双蒸水溶解，; ]! \- f6 s2 z+ j9 y( J8 }8 X
3.电磁搅拌仪搅匀，
( A/ _/ s8 O7 b# W, F* J4.再微孔滤膜过滤

daviddow

你看看sigma那里有说明，胰岛素是怎么溶解的。那里有个单子，是说各种物质的溶解方法。我就不给你找了。要是你找不到，就联系我

火云豹

呵呵 我这里每次来的sigma的产品都没有附带说明书 很麻烦

chuanbaozang

用1ml的酸化水溶解10mg胰岛素，溶解过滤分装，使用终浓度为10ug/ml。+ A; N3 |. y) \  c2 Z" p9 }, |
酸化水是100ml中加1ml左右冰醋酸，调节pH为1.9左右，高压灭菌，冷却即可。. h" M& U% V3 L
如果在超净台中打开sigma的胰岛素原装，我个人认为可以不过滤灭菌的。
4 e/ g: E9 }' Z以上仅供参考。

angel-sakura

回复 2# ambassador
# L& F1 E( S; |8 _用双蒸水。。。。这不会改变溶解渗透压了吗。。。细胞不都死了，PBS溶吧。。

ambassador

回复  ambassador 3 _3 e) t% f5 z
用双蒸水。。。。这不会改变溶解渗透压了吗。。。细胞不都死了，PBS溶吧。。5 H! h6 X  B! [0 Z
angel-sakura 发表于 2010-5-25 12:31

+ P/ V% M: K, C% |# O. }* S9 F* A$ b0 W, J9 ^) s6 U) G( E& [
+ s" }3 n- d- a$ p) t2 s
    可能我们那时没买PBS，是用胰酶与EDTA按一定比例来调节渗透压的。

haijunlv2004

1ml冰乙酸加到100ml双蒸水里制成酸化水，100 mg Insulin 用27ml 酸化水溶解，浓度约为100U/ml，过滤除菌，分装成1ml/EP管，-20℃保存。
) h' Y* C3 N& ^0 s0 p1 D! d用时先将1ml的储存液溶于5ml Hepes 中，再加入到500ml 培养基，终浓度约为0.2U/ml。, {- k, }) ?; f' S# ?& T) l0 Q
切勿直接将1ml储存液加入500ml培养基，会导致无法溶解。

火云豹

大家各抒己见 结合现有情况实践中