神经球传代问题？？

lujn100

我的原代神经球好不容易养出来了，但传代总出问题，总吹不成单细胞，我的protocol基本如下：收集细胞培养液，1000r/min离心2-3min富集神经球，弃上清，加入tryple（胰酶的替代物，之前Nature protocol上提到过）37度消化7min，机械吹打60下左右，1ml和200ul的枪头都试过了，镜检看还是没吹散，后来用1ml注射器又吹打几十下，好不容易吹散了，接种后好多细胞都不聚球了，估计是损伤太大挂掉了，各位有没有好的传代方法啊？谢了~

lujn100

回复 3# zsc78 * ^/ O# {. U: u5 @5 i# z

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* t" S# h" W, |* t4 @. _    谢谢哦~! j7 |& {) I% k$ q+ e% [9 a
    我的培养基里是不加血清的，用你的方法大概需要消化多长时间呢？我用普通胰酶接种原代细胞时消化5min，发现细胞基本都贴壁了，分化出好多小胶质，是不是消化太厉害了，所以我现在都不敢用普通胰酶了....

lujn100

回复 2# wgydys
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    用pbs反复洗，会不会对细胞损伤太大啊？而且我的培养基里都没有血清的，你在传代的时候一般吹多少下可以吹散啊？