神经球传代问题？？

lujn100

我的原代神经球好不容易养出来了，但传代总出问题，总吹不成单细胞，我的protocol基本如下：收集细胞培养液，1000r/min离心2-3min富集神经球，弃上清，加入tryple（胰酶的替代物，之前Nature protocol上提到过）37度消化7min，机械吹打60下左右，1ml和200ul的枪头都试过了，镜检看还是没吹散，后来用1ml注射器又吹打几十下，好不容易吹散了，接种后好多细胞都不聚球了，估计是损伤太大挂掉了，各位有没有好的传代方法啊？谢了~

rhmm

我都不敢用胰酶消化，感觉神经干细胞太脆弱，只是直接吹打，可是传代效果并不理想，请问各位你们说的胰酶加EDTA是哪个公司的呢，我只是用的Hyclone的，感觉不错，用过gibicol胰酶替代物感觉不理想

angelyannan

最好把神经球的培养直径控制在150um以内，我试过的，神经球越打越不容易打散，过度吹打造成的损伤很大，一般文献会说代神经直径达到100um后传代效果比较好。

happyhn

楼主的问题解决的怎么样啦 我也遇到这种情况

happyhn

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happyhn

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xiaodiao123

我们是这样做的：收集细胞培养液，1000r/min离心2-3min富集神经球，弃上清，然后加入1mL左右的液体用1ml的枪尖机械吹打，60下左右太多了，稍吹打几下或十几下便可，吹打太多，细胞可能就会死了。

cyumin123

神经干细胞的传代我们也一直没做好，用胰蛋白酶消化的话涉及到消化时间，消化浓度等问题，机械吹打的话关键是吹打的力度和吹打的次数，而且对细胞的损伤比较大。我们这边传代是采用机械吹打大概四十次左右，把神经球吹小，全部吹成单个的话后面很难成球，可能它的结合力破坏了吧，所以吹成小团的，发现效果还好。我这边不采用胰蛋白酶消化，因为终止的时候是用血清终止的，怕洗不干净，后面的细胞就全分化了。不知道各位用胰蛋白酶消化的朋友有什么好的方法，具体方法如何啊？

dingyx2009

再温和的消化酶，在其中反复吹打60次，对细胞损伤太大。就你的操作，可不可以这样改良一下：5 ]7 ~3 N. R( H& K3 h/ ?3 a1 W
1.枪头容易污染，用弯头的滴管，在火上烧，保持其口径 小，圆，滑（吹打有力，不刮伤组织）。; W7 d7 _1 ?9 ]
2。不用一次反复吹打60次，可以每次吹打15-20次，静止取上清，再加入消化液体，重复以上操作2-3次。这样不至于已经消化的单细胞，反复吹打，消化损伤为碎片。

SVZ

神经球的传代牵涉到的问题很多，你是做胎鼠吗？神经球培养的密度是多少？传代时神经球的大小？我是做胎鼠神经干细胞培养的，用的也是Ttryple，消化时间5-10min。用玻璃滴管或者进口1ml枪头很快就能吹打开。但是如果神经球培养时间过长，直径过大，就会和你说的一样，增加n多吹打次数也会有部分神经球顽固不化。所以建议你留意一下你传代时神经球的大小。( G) _/ l' e% G6 e  d6 Q9 `8 k. k