看看我的 小鼠iPS细胞经过 EB分化的问题（附图）

上海过客

我用的是 H- DMEM。15% FBS，NEAA， 丙酮酸钠，β-巯基乙醇， 谷氨酰胺 的 配方不知道  / P( i/ c4 @, c: a

* D, A# G4 p; D做了 三次 成功了  一次 ，不过这一次  24孔 都有跳动细胞 。
4 H( G; p$ T( c) k; m
. \1 F. e! r0 F, N) G' p) t  T   另外 的 细胞 ，感觉  EB 中央隆起的 地方 都 破了 ，不知道 是什么原因呢 ？/ E; m  f, F! d' C  d
  e+ B( m+ m  }: |7 w& z$ X7 k. m
想知道的 是 1  做 EB的 细胞浓度
4 m% D7 E% z0 Q8 b" C% k            2  换液时间7 K! p3 q- I+ A
            3  培养基的问题
! {7 ^* H! E' P9 L! o3 w            4  我的EB 中央 为什么会破
" ]: O, i* S+ v% o  ?: B0 h- E. y3 f
. {; C* J3 ^5 P# d) P1 x* Z1 X( l* W. \: o4 B' [* A: B& R
看图

上海过客

第二幅图的 中央 细胞 团 好像 烂掉了 。) |+ U6 R: A: L+ l8 T

' x2 J5 I/ @' [5 Q4 ]不知道什么原因。
7 `% p' Z+ e  [6 y# O
. L4 y0 }* F, r7 Y$ p4 p但是前面 做过三次 ，有一次成功了，24孔 都有跳动细胞。  其他两次和 上面的图相同

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楼上 ，  拟胚体  转移到 24孔板 后 ，换液 时间 大概是多少 呢？

上海过客

; l5 _" m+ c. e  e
) _- l5 ~+ f6 M8 e3 a+ ]  T+ z
嗯 ，那我的密度是有点大了 。
9 k+ C% P8 ~. w- B+ q+ a4 n2 \! u& h" K9 m

' l. Y- |9 ~3 ^$ G9 k我的 起始浓度时  12万/ml  .20ul小滴  。大概是  2400个细胞/滴 。# F$ e" X9 p) n# D: K; _/ B# S

% N9 L; y, H' {' e  v: y9 R8 u那就是 密度 有点大了 。  ) i  y/ s( u* ^$ Y) l* H6 I
( ^/ g# z: F: f* `- U

# L; d$ p4 p- h! o7 M; l3 ` 用 细菌培养皿  培养的  EB 感觉  很小，但是状态更好 。  我再试试这个方法

上海过客

我刚才比较了一下 分化培养基 。" ]; b  X, r, n; M/ u

% m  u; ]0 P2 a9 w- A4 X加了 丙酮酸钠  ，不知道是不是  这个问题 。/ ~5 s+ s, B' i

4 r1 q, v/ Z6 m4 O+ W' n2 H不加丙酮酸钠的  培养基已经配了 。  等等  看结果 。

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+ P1 }3 Y0 c  P3 z8 \/ R8 ^EB 分化胚胎干细胞的要求很高，你的胚胎干细胞必须制作精良。和液体没什么关系，$ H: o2 M3 s7 l+ a1 C+ }/ [
问题1： ...
& m; g* A' ]7 x! t5 U- D4 n- I5 I# `shewawa 发表于 2010-6-28 00:46

6 o8 a7 }4 y' w& l0 B8 o+ T1 b
8 S! C# s3 Z; p" Z  _5 _
" f, l5 I/ j* ~1 T& d2 \% H谢谢帮助 ，  是 做的 分化 ，但是不是做心肌分化，就是自由分化