重读 山中的文献，再问问题，四个外源基因 Southern为什么没有做？

上海过客

重读 山中的文献，再问问题，四个外源基因 Southern为什么没有做？% R! D6 ^8 b) m/ y% n5 i

6 B) q$ q9 [# \
# x( q  V- x/ j/ i* J% n既然证实了  转入四个基因 以后 会发生重编程，那么没有转入的细胞是不能编程的。0 ?1 B* x% a! e# `3 ~. h

! }  E! m4 H6 j; ~( H; u6 ^iPS 都被转入了四个因子吗 ？   1 j* ?9 G/ b) }/ g; b* p& p) l3 R& ~
$ v) |' C+ d1 L( V0 s* }3 \0 |9 v
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现在不是说 直接用病毒转染也可以 得到 iPS细胞吗 ？
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或者干脆用  ES培养基来 养 MEF细胞 ，养14天 ，会是什么结果？  以前没有人这么做过吧  ？

amazingt

很困惑，纠结ing

amazingt

不知道事实是什么样子，至少在无重编程因子存在的情况下的确是可以产生类iPS克隆的。也不认为会犯什么naive的错误，我看高人刘有话说，虽然有些观点也不敢苟同。

marrowstem

正如8楼所说的，我也有这点疑问，难道这些世界著名实验室的大牛能犯这么naive的错误吗？

treestem

回复 7# amazingt
0 ~- y5 J# X9 R: a+ x/ d+ ?$ h" Q  S, n: h) Z; Y/ x9 t+ `: b

& p0 }* J& H3 \! m3 z" Z1 M    可是，如果如你所说，任何因子诱导，都有可能出iPS克隆，但事实却不是这样，kamanaka的那篇文章及后来人的实践都是遵循这一规律啊

amazingt

"干脆用  ES培养基来 养 MEF细胞 ，养14天 ，会是什么结果？  以前没有人这么做过吧  ？"
7 M" E- j5 s' ^# P( O4 @8 m3 Q& ^% h. _2 [
我做了这个，作为阴性对照。可是和双刀的猜测正好相反，有类iPS克隆出现。

上海过客

楼主，请问你说的“现在不是说 直接用病毒转染也可以 得到 iPS细胞吗 ？”是指哪篇文献？谢谢！我认为，如果 ...- D  Q' g, x* j- {
双刀 发表于 2010-7-16 10:51

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/ y$ P4 S0 _8 T. I1 o( g新闻版里去找线索 吧 。
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. S4 c& c+ F! C; w7 i1 ~$ uMEF 里 就一定 没有多能干细胞吗？  为什么非要重编程呢？如果本来就存在多能干细胞呢？     你怎么排除 这个阴性对照的问题呢？ 用什么方法呢 ？% W' J7 {0 n* y( R
诱导过程中出现的克隆就一定是  重编程的细胞吗 ？你 说是，那你用什么证明你的 细胞是经过重编程的 呢 ？9 a# `1 A* Z* M* S  H* {9 [

2 e3 y& L: H) {) x我想起来一个科学笑话。
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一个科学家说 ：我发现了一个非常有意思的 现象
$ U6 u( a2 v; d) K  我做了一个实验： 我对跳蚤说跳，它就跳了起来。  然后我把跳蚤的腿都弄断了以后呢 。  我再 说跳 ，跳蚤置若罔闻 了 。所以结论就是： 跳蚤 腿没了以后就变成了聋子  。
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所以我认为 山中这个SOUTHERN没有做 是绝对的失误  。我觉得经费问题应该也解释不了这个问题 。 毕竟他 150种敲除小鼠都做了 ，  做个 SOUTHERN 是没有什么难度。
! q4 m% h: y! b& y& ~/ p     SOUTHERN  是唯一能证明 iPS细胞是 转入了四个基因的细胞。这个也只是必要条件，还不是 充分条件 。        
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" w# N3 [$ k: {) {6 w. G$ K  他这篇文章的附录里列了外源基因的  PCR引物，但是目前没看见  PCR结果 。 看过的同学   请  指出  。谢谢。

双刀

楼主，请问你说的“现在不是说 直接用病毒转染也可以 得到 iPS细胞吗 ？”是指哪篇文献？谢谢！我认为，如果是空载的病毒载体应该是不会诱发重编程的。ES培养基直接培养应该也不会得到iPS，因为ES培养基中的成分并没有诱导重编程发生的能力。个人见解，如有错误，请指正

wangming

小分子物质诱导也是同样。

baixueyao029

想法不错，你可以试一试