重读 山中的文献，再问问题，四个外源基因 Southern为什么没有做？

上海过客

重读 山中的文献，再问问题，四个外源基因 Southern为什么没有做？
* E; Z* U4 |/ a) I8 M+ a+ q9 b0 a2 m) F
" [; e5 W) Z' R; J: E
既然证实了  转入四个基因 以后 会发生重编程，那么没有转入的细胞是不能编程的。
% B- v$ T9 G, ?: U+ w
$ h& f9 }  J% A% p9 U) O" \1 riPS 都被转入了四个因子吗 ？   # T5 d  M. n- g# {  I
* n. i) O7 \7 {6 F% d
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现在不是说 直接用病毒转染也可以 得到 iPS细胞吗 ？
- W9 {: y: @. j+ {# e8 S. A$ k; u4 x, A

6 N7 ?, f) l0 b7 t- i: r  e9 J或者干脆用  ES培养基来 养 MEF细胞 ，养14天 ，会是什么结果？  以前没有人这么做过吧  ？

marrowstem

Good question  and  try to do it.

baixueyao029

想法不错，你可以试一试

wangming

小分子物质诱导也是同样。

双刀

楼主，请问你说的“现在不是说 直接用病毒转染也可以 得到 iPS细胞吗 ？”是指哪篇文献？谢谢！我认为，如果是空载的病毒载体应该是不会诱发重编程的。ES培养基直接培养应该也不会得到iPS，因为ES培养基中的成分并没有诱导重编程发生的能力。个人见解，如有错误，请指正

上海过客

楼主，请问你说的“现在不是说 直接用病毒转染也可以 得到 iPS细胞吗 ？”是指哪篇文献？谢谢！我认为，如果 .../ J& |+ H  w$ {. _6 t! ~
双刀 发表于 2010-7-16 10:51

3 S1 \8 O2 G% e3 s

0 u% S: E/ G# ?1 e新闻版里去找线索 吧 。7 A/ D2 K& S: X/ q4 G4 T

6 Q- V1 X# v5 c0 Z4 o5 KMEF 里 就一定 没有多能干细胞吗？  为什么非要重编程呢？如果本来就存在多能干细胞呢？     你怎么排除 这个阴性对照的问题呢？ 用什么方法呢 ？
7 F7 {* D1 Z, ~- B+ g5 ^ 诱导过程中出现的克隆就一定是  重编程的细胞吗 ？你 说是，那你用什么证明你的 细胞是经过重编程的 呢 ？( L: Y0 H! }+ E# G9 `/ ?7 I7 Q

6 n0 Q. A* T6 y! Y: E( o- |我想起来一个科学笑话。
7 E( w6 |2 h! y  }3 {0 _; a+ o; Y& k/ e0 W# F5 `' S9 ^6 E
一个科学家说 ：我发现了一个非常有意思的 现象
2 U$ Z& k# O+ {( D' R) n  我做了一个实验： 我对跳蚤说跳，它就跳了起来。  然后我把跳蚤的腿都弄断了以后呢 。  我再 说跳 ，跳蚤置若罔闻 了 。所以结论就是： 跳蚤 腿没了以后就变成了聋子  。
( ^  R, D# K! h5 C4 r* B! Q* e7 S3 O& p
    ; T1 h9 K5 B  Y7 G
所以我认为 山中这个SOUTHERN没有做 是绝对的失误  。我觉得经费问题应该也解释不了这个问题 。 毕竟他 150种敲除小鼠都做了 ，  做个 SOUTHERN 是没有什么难度。
% V4 L4 y. P% W8 ~- s" L/ M1 R     SOUTHERN  是唯一能证明 iPS细胞是 转入了四个基因的细胞。这个也只是必要条件，还不是 充分条件 。        
, f; F2 [: N) Z; q6 R, X1 A0 E* I2 R
  他这篇文章的附录里列了外源基因的  PCR引物，但是目前没看见  PCR结果 。 看过的同学   请  指出  。谢谢。

amazingt

"干脆用  ES培养基来 养 MEF细胞 ，养14天 ，会是什么结果？  以前没有人这么做过吧  ？"
2 ^" N7 q3 e% o, H1 J0 V
- N7 M: {7 \: M' Y5 }! f8 q6 x我做了这个，作为阴性对照。可是和双刀的猜测正好相反，有类iPS克隆出现。

treestem

回复 7# amazingt 5 j% h% F5 R7 J3 y3 {0 y5 n
$ t1 w# u& s$ @, ]  x0 O
9 @. G5 V. u8 q/ ?) T6 Y
    可是，如果如你所说，任何因子诱导，都有可能出iPS克隆，但事实却不是这样，kamanaka的那篇文章及后来人的实践都是遵循这一规律啊

marrowstem

正如8楼所说的，我也有这点疑问，难道这些世界著名实验室的大牛能犯这么naive的错误吗？

amazingt

不知道事实是什么样子，至少在无重编程因子存在的情况下的确是可以产生类iPS克隆的。也不认为会犯什么naive的错误，我看高人刘有话说，虽然有些观点也不敢苟同。