求助，原代神经干细胞的具体步骤。

xfyang2007123

各位仁兄，我最近在做神经干细胞的原代取材。不知是取材步骤的问题还是所用动物为幼年大鼠不是胎鼠的问题，总之所取的效果不满意。而且里面的杂质非常多，一天不换液就很浑浊。所以想求助各位，有谁取原代神经干细胞成功的话，能不能将您的实验步骤（具体的）发上来看看，也供大家学习学习。因为神经干细胞是所有细胞中比较难养的细胞之一，所以包括换液什么的总是感觉很头疼，例如：大家是不是都离心后换液呢？传代时是直接取半量的培养基还是离心后重新换培养基？。再就是大家传代是物理吹打还是胰酶消化？等等，我感觉有很多问题还不是很清楚，所以想请教各位，尤其是已经成功培养神经干细胞的同仁们。谢谢！

jennyshy

回复 10# huangfei2010
& b! f  O( q  `7 p  C& d, l6 A9 I! z( a1 s- c: u

) L) Y, c+ \5 k- H    16d的大鼠胎脑的海马是可以看到的，也可以分离出来，我用肉眼分的，其他的部分我就看不很清楚，但是海马是可以看到的，而且小心取也能分得很完整。14、15d的胎脑，去掉间脑等等，把皮层留下就可以了，呵呵宁缺勿滥，
, W( j5 B+ m1 P* d5 C也有文献说把整个脑扔进去养NSCs的，不过只取14d胎鼠的皮层养，个人认为中脑内一些神经元会混入到你养的细胞里。

jennyshy

回复 10# huangfei2010 2 z$ b$ @+ Z0 K+ l
6 t. U/ H' X) h) j0 [

9 z* t- S8 u4 b$ Z$ R    是可以分清楚间脑一些东西的，16d的海马都可以看清楚的。我用14d的，只取了大脑皮层，中间的一些东西都去掉了。
( C+ d9 n- P( u; }胎鼠脑比较软，解剖时要耐心，慢慢来，否则就一片模糊了……

xfyang2007123

回复 12# SVZ : l8 `9 ~7 B; E: e
现在知道为什么半量换液了，原以为是怕细胞环境改变太快，适应不了呢。谢谢了。

SVZ

以下建议，仅供参考：6 Y8 x4 e5 z2 k! r3 @: \
1。关于小血管：建议取材时一定要在显微镜底下仔细将脑膜和血管剔除干净
7 ]  I' w1 D8 z& G$ P7 `8 G5 q2。关于组织片：建议用200目细胞筛过滤。也可用200目，400目双重过滤。* ]: q! }( {: _" u- n
3。传代换液建议半量换液，据文献报道全量换液易致分化。

xfyang2007123

回复 10# huangfei2010 [/b了。看文献上胎鼠多是在解剖显微镜下取组织，不用显微镜的话估计就很难分出是那一部分

huangfei2010

回复 8# jennyshy
( T7 D+ n( r* j% t' a
7 j0 T% N$ F3 o$ {- u% y5 ?( I
/ Z" u; D; k5 W! d7 ~5 l    请教一下啊，胎鼠不都是直接取脑组织吗，好像分不清脑组织的具体结构啊

xfyang2007123

回复 8# jennyshy
( Z  `& o  }, p( d看来我得改进我的方法了，继续努力了，呵呵。

jennyshy

回复 7# xfyang2007123
. \4 Q6 R. Z* m5 ]) ^: n) f
8 e, H8 h, l/ O) g5 {幼年鼠比胎鼠杂质多，除了取材时要尽量弄干净些，还有就是过过筛网，再就是半量换液去除一部分杂质，不能一点都没有。

xfyang2007123

回复 6# jennyshy / m1 ^) p1 F( B; N0 S: r; m
谢谢指点。我取神经干细胞时就是按照一些论文上的方法取的，但是效果不好。而且至今我都不知道怎么除去里面的杂质，主要是小血管和组织片，因为神经干细胞球和杂质都是悬浮的。请问你们取得时候有杂质吗？又是怎么去除的呢？