MSC污染

aristolal23

先谢谢各位同学了，我的情况是这样的，自从6月份以来，每次取MSC的时候都会在不同的时间段出现细胞污染，有的是在原代就出现，有的是长到第一代，或者第二代，小弟非常困惑，希望能得到各位的指点。
( s4 E! [& w5 k! `* Z我取的过程大概是这样的。
# K: p8 O9 V# ]8 p% M/ n% s  n1 SD大鼠3-4周处死，用乙醇（100%）的浸泡5-10分钟，然后拿到超净台去两个大腿，去皮，用PBS洗十遍，然后用纱布把肉撕掉，再用PBS洗10遍，然后取细胞，我一般取骨垢端以及大腿的骨髓，取完以后放入离心管，800转，8分钟，然后用培养液吹起来，放入六孔板中，一般一个大腿一个六孔板，然后72小时或者96小时以后换液，传代。
+ Q- s8 w4 v" |9 m! U我所用的培养液是高糖DMEM,血清是GIBCO的，浓度是10%，加双抗。3 f" K2 e' h: c4 `- I! t1 ^& R2 n
请大家看看哪里出现问题了。

guosapphire

个人认为可将换液时间缩短一些，因为双抗只是抑制细菌的，时间长的话有些细菌就会产生抗药性，那就麻烦了。另外，建议原代的时候提高双抗的浓度。

franklinhg

乙醇75%试一试   PBS加2倍培养基中抗生素浓度  纱布不用  我一般是剪刀和镊子直接上 冲洗出来骨髓后 无菌筛网200目过滤后  离心1000g3分钟 25度  然后重悬 接种一般一只大鼠我接种一个T75 5-7天长的很好

franklinhg

培养基在加入10%血清和抗生素后 再次过滤 试一试

franklinhg

现在市面上的培养基假货很多

yuangaoqian

要说明一下出现的污染是什么污染，细胞污染可能是多方面的原因造成的，如人员操作、环境是否无菌、分离培养用具是否无菌以及培养基是否无菌等，而且污染也包括多种污染，如微生物、细菌、真菌、支原体、病毒等，有些是认为操作才能造成的，有些是血清等带有的，所以，最好说详细一点，最好附图。

deron

额，过程木有问题。应该与楼主操作或者培养箱有关吧。6 W7 [- d4 H& C
另外，为什么楼主用的是高糖的DMEM，高糖不是会导致MSC分化吗

aristolal23

个人认为可将换液时间缩短一些，因为双抗只是抑制细菌的，时间长的话有些细菌就会产生抗药性，那就麻烦了。 ...% o- U  P) J. ?3 `
guosapphire 发表于 2010-7-21 15:20

6 s0 ~6 I8 i) A. B. H& l
9 c8 e) P8 [0 _& {0 W6 U谢谢你的建议
& M, e6 x* U0 @' K6 N! F    如果换液的时间短了，细胞一般72小时以内细胞感觉帖不上

aristolal23

乙醇75%试一试   PBS加2倍培养基中抗生素浓度  纱布不用  我一般是剪刀和镊子直接上 冲洗出来骨髓后 无菌筛 ...
& m) W8 c3 c8 N0 Yfranklinhg 发表于 2010-7-21 15:21

9 Y& X; w  x2 O- \4 P7 U
& r6 J" z8 P9 w1 Z. A/ M0 ?/ ]8 e  m$ T

. I; e+ ~6 M7 o6 Q. n    谢谢你的建议
( S  `; B. w/ K4 u) {! B* _; y& J   我下次试一试。我估计可能和纱布撕扯有关，即使纱布消毒了。

aristolal23

现在市面上的培养基假货很多
- G/ `0 P8 P% [franklinhg 发表于 2010-7-21 15:22

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% w  t! H; H" s+ l& h* O4 W  C
    我们经常通过这公司买，已经建立了很好的关系了，这个可以排除，呵呵。