SP分选的细节问题

avril77777

请教做过SP分选的同仁，添加PI后需要染色多长时间再上机检测？谢谢~~~

小婉在此

回复 Girlmet_FISH 的帖子# W0 m  T0 X+ t" j! g5 a1 Y& ~& j
# t6 Q# K0 O: Y" H
我做的分选一直得不到标准的图啊

xubq2011

我们是上机前五分钟加PI

ying

PI在Hochest染好之后，上机之前现加都可以吧似乎～不过我没试过，我们平台老师说的～

Girlmet_FISH

回复 shandazlj 的帖子
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+ H4 w5 T1 t8 [% l广州。。。貌似不是一般的远。。

shandazlj

回复 Girlmet_FISH 的帖子
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请问你们实验室在哪儿？对外做分选吗？我是山东济南的。想做sp分选。但是这儿没有可供分选的流式细胞仪。想打听一下，哪儿的实验室对外做sp分选？

Girlmet_FISH

回复 avril77777 的帖子% u& d5 @5 j1 C- R1 \) u
+ @! F4 E# L6 G# i
罗丹明不是DNA染料吧？有报道罗丹明B以沟槽方式与单双链DNA相作用，但随DNA的浓度增加，发射能量减弱，如果做SP不合适吧？不就都成了弱染了。。。我们这没用过，你能否把这方面报道的文献发一份给我：rd6-sysucc@qq.com+ H. R- h( A" Q
多谢！

avril77777

回复 Girlmet_FISH 的帖子0 ]- ]5 n! {7 I; `5 M
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我看到有文献用罗丹明代替HO33342染料的，请问，你们那有这么做的吗？结果怎么样？

Girlmet_FISH

回复 avril77777 的帖子6 N' ~1 y3 }. R

# v4 O2 A7 I) C3 [+ a$ ~; G我们这做得很多，现在干细胞也是热门，经典的“拖尾”就是弱染侧群嘛，有很多图都是很漂亮的，这一般跟染色有关系，不同的细胞染色的Hoechst33342的浓度不一样，一般得摸一个实验条件，做个浓度梯度！再就是跟染色过程中的是否染色均匀也有很多的关系。我们用的是目前全球据说是最顶级的分选流式细胞仪，型号是MoFlO XDP

avril77777

回复 shewawa 的帖子
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恩，就是side population。请问，你看到做出来过经典的“拖尾”图了吗？- e; @9 v9 G4 C' a