请问如何进行EB分化为三胚层后的鉴定，主要鉴定哪些标志

牙牙丫丫123

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$ a* I( e  X5 V' X2 g6 i请问如何进行EB分化为三胚层后的鉴定，主要鉴定哪些标志

zerollx

回复 牙牙丫丫123 的帖子8 d  A& `2 S5 `9 t, I

2 L  ?9 U$ L3 O- b) y三胚层的鉴别
* q! w* V/ }: G# K* W  1、形态学观察：ESC在不同的发育阶段有不同的形态，在11天时则出现典型的三胚层形态，可用相差显微镜观察。1 x2 y: @! s# w
   2、三胚层中表达的特征蛋白的检测：免疫组化实验检测，EBs分化15d左右, 中胚层心肌细胞特异性标
9 f( c# a1 q- B0 N. y志蛋白c TnT( 图9) , 外胚层特异性标志蛋白Nestin
% b/ f  y6 Y3 V; O 3、三胚层中标记基因的检测：在ESC发育各阶段提取总RNA,个标记基因的引物进行RT-PCR，电泳鉴定片段大小来检测是否有表达。
. v3 T; {' E" b# p! V8 O) e4 i' {0 t     内胚层：特征性基因转甲状素蛋白、 甲胎蛋白在EBs 分化的初期不表达,从分化的第7d 起开始表达
5 d/ X* U6 i- \8 H5 B6 \    中胚层：波形蛋白等- G* ?/ q' J- G, M3 |7 U% J
    外胚层：巢蛋白等! h7 y2 r* p2 i- x6 C" F6 a
   具体你可以看这篇文章：体外分化过程中小鼠拟胚体的细胞学特征及基因表达模式

牙牙丫丫123

呵呵，不错……4 i* h  w( K6 D) `2 V4 J

iyaofying888

非常好呀

coralqin

刚想回复呢，仔细一看zerollx 贴出了本人以前发的一篇文章，惭愧:$

细胞海洋

回复 coralqin 的帖子
$ U5 g( _& K6 W1 ]' P5 H+ d$ c' z) N$ M  D/ b  ]
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jjjk127

好东西 ，学习:)

lp871

:D:D:D

shuishan

请教各位大牛：想做IPS向心肌细胞的诱导分化，请问形成EB后贴壁生长多久可见到心肌细胞，是不是可以见到心肌细胞跳动？上面说15天左右可检测到心肌细胞特异性标志蛋白c TnT，若想用分化的心肌细胞做下一步实验，是不是只要检测到了这种标志就可以了？怎样将其纯化了？好像心肌细胞是不可再生的，那这样分化得来的心肌细胞能否进行传代增殖呢？

细胞海洋

回复 shuishan 的帖子2 |! L: G+ E3 [2 N" U
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