请问如何进行EB分化为三胚层后的鉴定，主要鉴定哪些标志

牙牙丫丫123

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" y6 u% x: u/ ], a请问如何进行EB分化为三胚层后的鉴定，主要鉴定哪些标志

zerollx

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" l: {  }1 K: ^7 d) [& K0 K& B! X7 `; a
三胚层的鉴别) Z( R7 u& N. p# |
  1、形态学观察：ESC在不同的发育阶段有不同的形态，在11天时则出现典型的三胚层形态，可用相差显微镜观察。9 C1 U( O2 D, S- ?3 e
   2、三胚层中表达的特征蛋白的检测：免疫组化实验检测，EBs分化15d左右, 中胚层心肌细胞特异性标
8 o' X5 P! |3 N2 o* R志蛋白c TnT( 图9) , 外胚层特异性标志蛋白Nestin( Q6 u9 C5 [9 O$ V9 c( S
3、三胚层中标记基因的检测：在ESC发育各阶段提取总RNA,个标记基因的引物进行RT-PCR，电泳鉴定片段大小来检测是否有表达。
( Z! f6 H' P' D* x     内胚层：特征性基因转甲状素蛋白、 甲胎蛋白在EBs 分化的初期不表达,从分化的第7d 起开始表达
3 Y4 z% A8 O4 l. U  l! w    中胚层：波形蛋白等
' o, X) Z, ]3 h, x    外胚层：巢蛋白等
3 ]% l2 R9 d* e5 ?5 v   具体你可以看这篇文章：体外分化过程中小鼠拟胚体的细胞学特征及基因表达模式

牙牙丫丫123

呵呵，不错……% A& Q% H9 h; h/ T# v: I

iyaofying888

非常好呀

coralqin

刚想回复呢，仔细一看zerollx 贴出了本人以前发的一篇文章，惭愧:$

细胞海洋

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) L8 x5 O( y0 z- k2 [
: k# M" X+ c/ u8 f* H8 @欢迎原创作者 发表意见

jjjk127

好东西 ，学习:)

lp871

:D:D:D

shuishan

请教各位大牛：想做IPS向心肌细胞的诱导分化，请问形成EB后贴壁生长多久可见到心肌细胞，是不是可以见到心肌细胞跳动？上面说15天左右可检测到心肌细胞特异性标志蛋白c TnT，若想用分化的心肌细胞做下一步实验，是不是只要检测到了这种标志就可以了？怎样将其纯化了？好像心肌细胞是不可再生的，那这样分化得来的心肌细胞能否进行传代增殖呢？

细胞海洋

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