请问如何进行EB分化为三胚层后的鉴定，主要鉴定哪些标志

牙牙丫丫123

9 W- Q, e; \0 `: e, Q! m1 x- N9 a

& D& m: ~$ N3 V/ `( z* Q; d请问如何进行EB分化为三胚层后的鉴定，主要鉴定哪些标志

zerollx

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& u- v" A, t6 t3 o; t8 m* V* I8 L' R( m
三胚层的鉴别' u- t" j" G. J; S, [- @( ~
  1、形态学观察：ESC在不同的发育阶段有不同的形态，在11天时则出现典型的三胚层形态，可用相差显微镜观察。
( {$ t4 B0 u" L# c" e5 ~   2、三胚层中表达的特征蛋白的检测：免疫组化实验检测，EBs分化15d左右, 中胚层心肌细胞特异性标$ a. `" o: x4 I' c. e
志蛋白c TnT( 图9) , 外胚层特异性标志蛋白Nestin6 i, u) m/ ^7 Q8 l4 l0 j! o9 ^
3、三胚层中标记基因的检测：在ESC发育各阶段提取总RNA,个标记基因的引物进行RT-PCR，电泳鉴定片段大小来检测是否有表达。6 p5 c/ x$ k1 M$ j5 L+ R5 m
     内胚层：特征性基因转甲状素蛋白、 甲胎蛋白在EBs 分化的初期不表达,从分化的第7d 起开始表达
. [" M! s0 H* a$ _! r    中胚层：波形蛋白等
& V( l! s+ b% [+ {    外胚层：巢蛋白等- e' o6 P7 B* D5 W) |& F& B
   具体你可以看这篇文章：体外分化过程中小鼠拟胚体的细胞学特征及基因表达模式

牙牙丫丫123

呵呵，不错……* U4 K+ q* h4 d# a* F/ s* `

iyaofying888

非常好呀

coralqin

刚想回复呢，仔细一看zerollx 贴出了本人以前发的一篇文章，惭愧:$

细胞海洋

回复 coralqin 的帖子9 ?3 @% c: M7 I- y0 @- F$ v

7 z9 Z8 R( ]9 x; X欢迎原创作者 发表意见

jjjk127

好东西 ，学习:)

lp871

:D:D:D

shuishan

请教各位大牛：想做IPS向心肌细胞的诱导分化，请问形成EB后贴壁生长多久可见到心肌细胞，是不是可以见到心肌细胞跳动？上面说15天左右可检测到心肌细胞特异性标志蛋白c TnT，若想用分化的心肌细胞做下一步实验，是不是只要检测到了这种标志就可以了？怎样将其纯化了？好像心肌细胞是不可再生的，那这样分化得来的心肌细胞能否进行传代增殖呢？

细胞海洋

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