关于油红O染色

feiyang

请教大家！我做MSC诱导分化为脂肪细胞的油红O染色。1.在油红O加三蒸水3：2稀释后，没有通过定性滤纸，而是通过70um过滤篮过滤，然后静置，可是染色结果不好，看起来好多脂肪细胞并没有染上色，而且还是有不少杂质。2.一定要淡苏木复染吗？我没做。

glysh

hah 太巧了，我今天刚了油红染色，效果还不错。
1 K  x; Y5 z8 s5 D# R第一，没有滤纸的话，可以用口罩过滤；一般没有上色的很有可能不是脂肪细胞；9 \5 F+ Y3 H$ J$ D1 h/ y) ~0 L
第二，不需要苏木素复染

regene

呵呵，同意楼上，不过滤问题也不大，但最好过滤以去杂质。! @3 w6 ]- I/ b7 a; ~( h2 G# F# z
即使不染色，脂滴在光景下也是很容易分辨的。

luoziwei

是的，显微镜下就能观察到油脂滴的

tangyvhuang

我们的规定是五步，但是基本上就是前两步就够了，后面的不做都，也不用过滤
; F# b& V. v; x6 p$ j油红O 0.5g 溶于100ml异丙醇中作为储备液，用的时候同蒸馏水3：2的稀释9 O. }6 ?) h( H# b2 }5 @% \
脂肪细胞的油滴很明显的: ^" ~4 T3 A" N' l( \8 A
1，固定：吸弃培养液后加入固定液5min." k4 _; D4 I* B7 Q
2,吸弃固定液，加入染色液15min后水洗一次镜检观察。
% c% |; e% C$ V# _3，60%乙醇分色，
1 h4 {- V/ g. ?3 e' B8 F& Q4，苏木晶复染
; |$ O$ x7 Z& L+ T, h  r* J5，水冲洗至变蓝。
0 U( \. F7 T2 s' ?* y$ }  W5 W( t

feiyang

我镜下看到很多脂滴的细胞，就是没染上色，不知什么原因呢？

glysh

回复 feiyang 的帖子
8 a7 _& O2 t/ r! ]4 C
& Q$ w$ l% t1 o0 l% L' j4 F( i很有可能是空泡！

碧海蓝天

油红O是为了染脂滴,而苏木素是为了染细胞核,可以帮助看清细胞形态,& v1 i$ }" ^% [! Q$ V3 {" R* ~- z  f
我个人认为油红O在染色前是必须要过滤的,否则杂质太多,影响观察视野.
+ r. j( D4 z8 k/ l9 H  R另外油红O染脂滴是很容易的,如果没有染上,那就可能不是脂滴而是空泡,. g" g/ N6 \5 h% `2 |
还有如果低倍镜下看到有红色但看不清染色,最好换高倍镜甚至是油镜.

feiyang

那空泡是哪里来的啊？我染色的皿底有一块一块的染色，但是颜色非常深，镜下看就像是黑的，好像不对唉。

maxiaona

1、应该是需要过滤的，不然染色后观察时杂质很多。
+ J+ T; \, P/ p; b( p2、要注意配好的油红O工作液要在2个小时内用，不能放置时间过长。
- _) @+ V0 F  y' I3、苏木精复染可以使细胞形态更清晰，拍出来的照片效果也会更好。
4 {5 A- v! R$ E% H2 A7 n& @' Q* E4、之前固定的步骤很重要，没有染色很可能也和这个有关系，我们使用的是10%中性甲醛固定30分钟。
3 C" E: P4 ^# ~7 o, i5 r