关于油红O染色

feiyang

请教大家！我做MSC诱导分化为脂肪细胞的油红O染色。1.在油红O加三蒸水3：2稀释后，没有通过定性滤纸，而是通过70um过滤篮过滤，然后静置，可是染色结果不好，看起来好多脂肪细胞并没有染上色，而且还是有不少杂质。2.一定要淡苏木复染吗？我没做。

glysh

hah 太巧了，我今天刚了油红染色，效果还不错。
5 S- b; }+ S) [  ~( N( x第一，没有滤纸的话，可以用口罩过滤；一般没有上色的很有可能不是脂肪细胞；
+ q# g0 Z7 w$ v  @第二，不需要苏木素复染

regene

呵呵，同意楼上，不过滤问题也不大，但最好过滤以去杂质。6 Z! r& P8 a  ~0 L5 Y+ y% z
即使不染色，脂滴在光景下也是很容易分辨的。

luoziwei

是的，显微镜下就能观察到油脂滴的

tangyvhuang

我们的规定是五步，但是基本上就是前两步就够了，后面的不做都，也不用过滤% v  M, e& O' K& r5 e3 @3 {; x  D
油红O 0.5g 溶于100ml异丙醇中作为储备液，用的时候同蒸馏水3：2的稀释/ o3 i  `: m6 u6 }' t- V
脂肪细胞的油滴很明显的
5 {* }: C& E5 C+ n9 _# b1，固定：吸弃培养液后加入固定液5min.
8 i! D# Q  L3 a% M& z* u9 i9 u% T7 g2,吸弃固定液，加入染色液15min后水洗一次镜检观察。+ H; U5 b( b& U/ h* o# C) D; p
3，60%乙醇分色，$ x% T& o: H( J( `
4，苏木晶复染! G3 G: C% e. ?! o# I! O
5，水冲洗至变蓝。* x( L% e, ^; q' h1 r4 A& k

feiyang

我镜下看到很多脂滴的细胞，就是没染上色，不知什么原因呢？

glysh

回复 feiyang 的帖子
- o3 T% I- L8 _& g; U6 r
( P2 D  W/ e7 r$ x. b5 p8 L很有可能是空泡！

碧海蓝天

油红O是为了染脂滴,而苏木素是为了染细胞核,可以帮助看清细胞形态,
" _  V. U1 ~7 A7 `+ ]我个人认为油红O在染色前是必须要过滤的,否则杂质太多,影响观察视野.( X5 [6 Q5 C7 x
另外油红O染脂滴是很容易的,如果没有染上,那就可能不是脂滴而是空泡,  R' Y7 M( J. _# G# T
还有如果低倍镜下看到有红色但看不清染色,最好换高倍镜甚至是油镜.

feiyang

那空泡是哪里来的啊？我染色的皿底有一块一块的染色，但是颜色非常深，镜下看就像是黑的，好像不对唉。

maxiaona

1、应该是需要过滤的，不然染色后观察时杂质很多。' I8 U) {2 p) h
2、要注意配好的油红O工作液要在2个小时内用，不能放置时间过长。
# O8 B5 R6 ~" f+ u& ~# S3、苏木精复染可以使细胞形态更清晰，拍出来的照片效果也会更好。' A* n7 T1 \. l
4、之前固定的步骤很重要，没有染色很可能也和这个有关系，我们使用的是10%中性甲醛固定30分钟。+ b6 W/ _% T; A1 U5 k0 _  t