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回复 ghfvcat 的帖子8 s8 v( J4 h* f) @. P
) M8 Y5 N( R) |建议参考Takahashi《Induction of Pluripotent Stem Cells from Adult Human Fibroblasts by Defined Factors》文献
: U2 C& w4 o# ^1 ]7 v. |* h6 t1 X5 d: Z( s0 s" S
4 E; [2 `& l$ K; q, E# B& e
! }. D7 A4 _2 g/ x6 t我自己的克隆。。。
0 G* |6 G5 t- ?5 n9 ]2 V/ l+ D! H! l& o0 f2 U& I \
0 k. z8 M9 }" a! }" U8 ~
& g M, z# R' w一个十厘米的皿我打两个点。。。每点200微升液体。。。
7 g8 O) }/ R& r7 F" g* S
2 ^# e% i- _3 G
], r, p$ u# n; {! t: c) T: B3 |9 l4 I
也有人说把克隆团块用胰酶消化计数，但我个人认为不好。。。8 V$ r m: v0 e' |
根据文献《Mitochondrial Metabolism Modulates Differentiation and Teratoma Formation Capacity in Mouse Embryonic Stem Cells》$ e* S; K: D/ _
( I8 t. D( O9 j4 d. b- L |4 w2 j7 m9 {
文献中有一个确定的观点，细胞越容易分化，成瘤率越低。。。
# n3 @$ l6 _+ ~1 q4 C% Q; }( U根据克隆传代经验，克隆团块是经不起胰酶消化的，消化之后分化率太高；
! n3 i3 r: ^- j' H就算是用四型胶原酶消化，也有一定的分化率；' v P! {+ Z9 H, A P: \% g' f) X3 G
$ r& k. c9 H" S1 A% h所以参考takahashi的方法，用四型胶原酶消化之后收集克隆，不做计数，直接注射。。。: e: x, z* ~+ Y4 V
( }" ]- n" ?8 p
甚至可以用机械法把克隆一粒一粒收集下来，这样更保险，就是工作量大了一点。。。 |
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发表于 2011-2-12 11:42
