问个问题，人类iPSC做畸胎瘤

ghfvcat

问个问题，人类iPSC做畸胎瘤的时候裸鼠行不？. B2 K+ \+ y( U# G2 X. _
我看文章上有的用裸鼠，有的用SCID鼠，甚至NOD-SCID的，问一下，裸鼠的成功率有多高？3 w0 i* b+ A0 k2 a5 Z" F
用雌的还是雄的有区别么？

瑟瑟狼

:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol
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今天刚刚检查了一遍老鼠。。。我的畸胎瘤出来了，各种开心，各种兴奋！！！, Z- e6 S: H8 ?
0 P+ {6 _+ v& x3 s& m5 g
我用的人的IPSC，BLAB/c 裸小鼠，注射时候是四周龄。。。2 |: b0 K6 V, X3 C
雌雄我没设对照。。。
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至于说选用老鼠，关键是免疫抑制的问题。。。
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BLAB/c是T细胞缺陷，SCID是T、B、NK细胞全都缺陷。。。$ g7 l# z, d6 D9 f6 k" x+ G
因为他们有免疫缺陷，所以饲养条件要求高  L$ Y( f: F- @; F/ k8 \

  Y/ t7 X8 X& A3 u; R! d: b) w至于注射时机，也很重要。。。
  i4 x: I% u- B" s7 c# W- G) G* W成年裸小鼠（6--8周）较普通鼠有较高的NK细胞活性，但幼鼠（3--4周）NK细胞活性低下。。。% D- c2 G. ]6 m" w1 R1 S" I

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1 g( W4 m1 U) z' f4 L! w+ w6 X1 z

ghfvcat

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, H& {% C1 W# u5 C5 k) r. Q* o' J, v5 w
呵呵，恭喜恭喜，  ?" B, E+ Q/ w1 ~7 w
还没开始打，心里没啥底。
  q0 f& y- a! K4 |请问你一只老鼠打了多少细胞？打在什么部位？

瑟瑟狼

回复 ghfvcat 的帖子& c) ]' B0 O; B3 U
; y/ L, e& U0 y& g  \3 s) r
建议参考Takahashi《Induction of Pluripotent Stem Cells from Adult Human Fibroblasts by Defined Factors》文献
, t$ U) \" S1 K6 Y5 h) z' l4 P! Z1 O- c1 l7 S2 x0 [+ u

: u3 G- z" o4 X8 _9 M; M1 M2 l- e+ p. b/ C
我自己的克隆。。。
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; C2 Q6 I  E6 u0 Y' O- {$ Q3 ?" O, A
一个十厘米的皿我打两个点。。。每点200微升液体。。。
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2 w( W. i. @8 J# w
9 j( v# @  H; V6 \& m( O* i, k也有人说把克隆团块用胰酶消化计数，但我个人认为不好。。。* Q& J; f8 d& h" H) s6 J
根据文献《Mitochondrial Metabolism Modulates Differentiation and Teratoma Formation Capacity in Mouse Embryonic Stem Cells》4 R: [- G# d3 N3 F

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1 q, T! N- V% N! t, w文献中有一个确定的观点，细胞越容易分化，成瘤率越低。。。
: I# g  Z8 j4 f' S5 I1 v5 {4 V根据克隆传代经验，克隆团块是经不起胰酶消化的，消化之后分化率太高；
; v+ s" @- Z1 B) f4 O- n5 c1 A就算是用四型胶原酶消化，也有一定的分化率；
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, P, o/ \. p7 h所以参考takahashi的方法，用四型胶原酶消化之后收集克隆，不做计数，直接注射。。。2 }' U# ^4 `3 B  t! O

5 G: u# o% [) R9 y6 N9 [甚至可以用机械法把克隆一粒一粒收集下来，这样更保险，就是工作量大了一点。。。

瑟瑟狼

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9 \6 M, s0 x/ @% k, a  ~; }: E) w* z6 ~/ E* X2 A
忘了给你说注射部位，一般在皮下松弛部位就可以，原则是成瘤之后不影响老鼠运动。。。

zsycgz

瑟瑟狼很给力！很不错哈！学习了！:lol

gact

太给力了。。。这个贴 我收藏了。。

ghfvcat

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8 \2 t! S% G: t. i6 s( M" h4 f& ?% [- m8 E2 L
回帖庆祝一下我的畸胎瘤成功长出，多谢瑟瑟狼童鞋，' R7 m( M' c2 ?4 Y0 v
再麻烦问一下，各位在上海的同仁，哪位实验室有切片机的，能否帮忙做个切片？实验室没有切片机，实在悲剧。$ ~$ S! t" D" x- y' D% [: k% b( A, X

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