问个问题，人类iPSC做畸胎瘤

ghfvcat

问个问题，人类iPSC做畸胎瘤的时候裸鼠行不？
# ?9 @% l5 h2 G  I) h我看文章上有的用裸鼠，有的用SCID鼠，甚至NOD-SCID的，问一下，裸鼠的成功率有多高？0 o& ^! D, s3 f  r) v0 {) \0 c( i
用雌的还是雄的有区别么？

瑟瑟狼

:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol
9 ~# m- \+ _# {" T4 F# {
4 i- Z5 H* j0 F2 R" S( x' u7 s8 k+ F今天刚刚检查了一遍老鼠。。。我的畸胎瘤出来了，各种开心，各种兴奋！！！
7 K& r  [* e  K2 K4 A% n: @2 I- @
* R! n; G- h. P% W我用的人的IPSC，BLAB/c 裸小鼠，注射时候是四周龄。。。
( N8 f8 ~' }: J2 U, H1 p& q雌雄我没设对照。。。0 H" j0 }* e( y' y* W5 c3 b% y

# I) ?* ^5 a9 I, I* b至于说选用老鼠，关键是免疫抑制的问题。。。8 l  i9 L+ c* B1 ^0 _

# e7 ^7 `8 t- F$ W3 j3 xBLAB/c是T细胞缺陷，SCID是T、B、NK细胞全都缺陷。。。6 T7 }$ V# ?$ T$ _
因为他们有免疫缺陷，所以饲养条件要求高! |, u/ d/ W4 j$ @0 D( C  U# M/ \
8 ~  X, W" ~2 A7 W$ U* d
至于注射时机，也很重要。。。
! O5 i& N8 x7 o0 ]- r成年裸小鼠（6--8周）较普通鼠有较高的NK细胞活性，但幼鼠（3--4周）NK细胞活性低下。。。' X; x9 Y" v9 N3 ]/ Q( z
, v# [4 R1 \; {  D" n
2 d  q8 t; D1 o# u1 I9 a
+ `1 x  j4 S( Q0 k

ghfvcat

回复 瑟瑟狼 的帖子( w8 W( z# z6 X, j* i7 [& O

: E' k: _/ m+ t3 L6 U呵呵，恭喜恭喜，
9 f3 l3 K! X3 D还没开始打，心里没啥底。
' q" c: a  C! J  y请问你一只老鼠打了多少细胞？打在什么部位？

瑟瑟狼

回复 ghfvcat 的帖子
# p' u  f% Z( e/ _5 d8 H# ?+ a8 u- \. @" s2 a
建议参考Takahashi《Induction of Pluripotent Stem Cells from Adult Human Fibroblasts by Defined Factors》文献
0 h7 B3 E% H: J8 |
4 u" K5 i6 u: d" o: g; S8 m4 Q2 W/ Q; A& X- ^: r0 L+ f% M: D" C

" C2 S$ n, R+ M; F我自己的克隆。。。+ @5 Q' c/ u% k1 v& V

1 y5 F9 {/ n" u3 o1 |; n3 v
+ I9 v% @5 l5 h
2 I* `, a8 ^$ m6 _8 m一个十厘米的皿我打两个点。。。每点200微升液体。。。
6 L/ O% M' J2 v" ~' O" k& D1 V0 E' N+ `! p4 k! p" M. W1 }2 E
! T4 f% E, G- g  L3 B0 W; e3 \# R1 b
0 c2 p/ N* P% n2 Q0 n8 @- c
也有人说把克隆团块用胰酶消化计数，但我个人认为不好。。。/ e: S; U9 I- @, X
根据文献《Mitochondrial Metabolism Modulates Differentiation and Teratoma Formation Capacity in Mouse Embryonic Stem Cells》9 p2 l7 b6 K4 z! J( ?3 S

6 K& U, V& V) {$ k  P5 u5 T- t. v- y5 P8 N, i* f: w
文献中有一个确定的观点，细胞越容易分化，成瘤率越低。。。
" {5 y; x. y7 g! s$ H: |- u根据克隆传代经验，克隆团块是经不起胰酶消化的，消化之后分化率太高；* }, D8 b1 P; P3 D' O8 i
就算是用四型胶原酶消化，也有一定的分化率；
1 D( R2 x$ m; y/ b; E
6 k! O6 z0 g% I; b所以参考takahashi的方法，用四型胶原酶消化之后收集克隆，不做计数，直接注射。。。+ L1 ~3 J  C2 z3 L; |$ o; n8 Z/ K
: k3 {9 X0 z* ^; {/ F# N
甚至可以用机械法把克隆一粒一粒收集下来，这样更保险，就是工作量大了一点。。。

瑟瑟狼

回复 ghfvcat 的帖子
$ K" l: Q& O( J$ `+ n/ V" F+ p7 m; D% n2 N
忘了给你说注射部位，一般在皮下松弛部位就可以，原则是成瘤之后不影响老鼠运动。。。

zsycgz

瑟瑟狼很给力！很不错哈！学习了！:lol

gact

太给力了。。。这个贴 我收藏了。。

ghfvcat

回复 瑟瑟狼 的帖子
9 J6 D) p2 ~2 e" r* R* ~0 h" j- I( [  @: o$ w6 s7 L) j
回帖庆祝一下我的畸胎瘤成功长出，多谢瑟瑟狼童鞋，! X* Q9 f3 |4 l
再麻烦问一下，各位在上海的同仁，哪位实验室有切片机的，能否帮忙做个切片？实验室没有切片机，实在悲剧。
5 b: `$ e9 C7 t, E* o
- @, r% u, O- v