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[请教] 电转染牛成纤维细胞的问题   [复制链接]

idealgas

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包包
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楼主
发表于 2011-4-13 14:41 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
最近在做电击转染牛成纤维细胞的实验。
7 m: d" Q: Z* G0 w仪器设备为 biorad的 genepulser MXcell，用的是电极杯做转染。转染用的缓冲液为DMEM 高糖无血清培养基。细胞为牛胎儿成纤维细胞，质粒为构建的一个带有DsRed 2标记的质粒，各种电击条件都摸索了，包括方波和递减指数波，而且电击前后细胞计数结果能够达到50%的死亡率，但是24小时和48小时时观察细胞荧光情况，居然没有一个细胞发光，不知道为什么，还请各位做过多次电转或者电转高手来解答。非常感谢。
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cony

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沙发
发表于 2011-4-13 21:11 |只看该作者
我做过一段时间电转，除了电击参数很重要外，DNA纯度，DNA与细胞比例也很重要。
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trl137

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藤椅
发表于 2011-4-13 21:20 |只看该作者
我做过一段时间牛胎儿皮肤成纤维细胞的转染，我一般用的都是DMEM低糖无血清培养基，你可以试试。其实影响转染效率的因素很多，不仅有电转各种参数，还与所转DNA的量、浓度，以及细胞密度等相关。
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runsong

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板凳
发表于 2011-4-13 23:48 |只看该作者
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没用电转液吗。电击时细胞应该悬浮在电转液里。
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runsong

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报纸
发表于 2011-4-13 23:49 |只看该作者
电转液配方

Optimization of square-wave electroporation for transfection of porcine fetal &.pdf

376.49 KB, 下载次数: 793

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idealgas

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地板
发表于 2011-4-16 22:26 |只看该作者
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0 O7 U5 N) h) q# ?" a1 ]5 D! A# K4 K" \/ _/ c; H! X1 l4 D1 t
谢谢您的回复，能把配方发到我的邮箱吗？不知道为什么下载不下来。idealgas@Foxmail.com谢谢谢谢。
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idealgas

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7楼
发表于 2011-4-16 22:28 |只看该作者
回复 trl137 的帖子- Q% k$ {2 I' Q. B. X

; V; W& P: M  q$ C我用的是10μg对应1×10^7个细胞，质粒用仪器测过，纯度很好。
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trl137

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优秀会员 金话筒

8楼
发表于 2011-4-16 22:46 |只看该作者
既然你排除了上述几种因素，那就试试低糖培养液
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细胞海洋

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小小研究员

9楼
发表于 2011-4-17 10:11 |只看该作者
回复 idealgas 的帖子
! {5 d$ N2 l3 C/ V9 V/ B
/ i; J2 y, e2 ?& I可以下载 不要使用迅雷
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如以莫

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10楼
发表于 2012-5-13 14:37 |只看该作者
同求电转液配方
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