做做免疫组化石蜡切片好还是冰冻切片好？

sidalin301

做免疫组化石蜡切片好还是冰冻切片好？
% \3 S/ Y: A0 K$ a$ P1 x大部分人都说石蜡切片好，可我看到好多外文文献都是用的冰冻切片，到底哪个好一些？
0 m9 o* y% q) ~0 y& u本人要做背根神经节、脊髓、脑干和大脑的免疫组化，现在正处于抉择阶段，请有经验的专家给些建议，多谢了！  n8 e5 s9 \  D/ K! R+ V

zhangyan813

我建议你做冰冻切片，我刚做了大鼠睾丸的冰冻切片，效果很好，给你以下建议：9 R/ I2 S% A/ j$ f( S* B( A- v7 b  B
  1. 做冰冻切片最关键的是固定和脱水。你也可以提前灌注固定，这样对于大脑组织可能更好一点。我用的是10%，15%和18%的蔗糖溶液做的脱水，一开始脱水1个小时，效果很不好，后来减少到40分钟，效果就好很多了。你可以根据你的样品的年龄、大小等再试条件。" Q1 a$ n3 Y$ B+ I9 z/ M
2. 载玻片一定要用多聚赖氨酸处理后才好用。现在试剂公司有处理好的片子买，直接买一包回来做就可以了，很方便的。
5 F6 c' ?  Y  T, n 3. 抗体的浓度要比直接作用于细胞的浓度要大一些，这样做出来的免疫组化才好看。

sheepthief

5 x& N4 l- @2 \  M- M
9 f1 U" Y/ f# t
石蜡切片对于其他组织比较好，但对于脑和脊髓等组织还是做冰冻切片比较好，因为石蜡切片细胞和组织缩水都比较严重，脑和脊髓等含水量多的组织作石蜡切片会导致细胞严重变形，影响观察。2 ]4 l% d7 |- ]2 a8 V2 U
一般建议选大鼠，经水合氯醛（400 mg/kg）腹腔注射麻醉满意后，立即用0.9% 盐水及4%多聚甲醛进行灌注，灌注完毕后取出脊髓及大脑，将其置入含4% 多聚甲醛液中后固定24 h(4 ℃)，转入30%蔗糖溶液中脱水72～76 h(4 ℃)，0.01 mol/L、pH7.3 PBS清洗后，将脊髓和大脑组织分别使用冰冻包埋剂包埋，冰冻切片机行横向脊髓及大脑组织切片，片厚16 μm，贴在涂有多聚赖氨酸的载玻片上，-20 ℃冻存备用。7 ?! Y  Z& h+ [3 n+ l. ?8 \
我不是专业的，但是和同学做过玩

sidalin301

回复 zhangyan813 的帖子
6 d# M9 H. a% B* |
# X+ f  @5 o! T% q% p( F2 r多谢指点！感激万分！

sidalin301

回复 sheepthief 的帖子7 N. I) p$ k" X7 a# ?9 [6 V9 h

) G- _4 ^( c$ r$ T5 D% c4 X  m多谢指点！感激万分！

gqs2872022

国外的一般都做冰冻切片，但是理论上来说，石蜡切片的细胞形态比冰冻切片的要好很多，3 `# v$ q. b# p. I# _* |3 b
特别是在组化上，需要更清晰的形态分布。冰冻切片的话就视技术员的技术好坏而定，高手的话基本和石蜡没多大区别，但技术不好的话，对细胞核/浆还是有影响的。另外就是，还容易产生冰晶导致切的不好，所以一定要做冰冻切片的话，用梯度蔗糖平衡很重要，另外就是冷冻前要把液体吸干。
* o6 _  e# }9 A- J" K4 j) _还有就是，冰冻的组化背景还是偏高，之前我看到的发NATURE等一些的文章，虽然抗体着色好，但其背景颜色较高，用病理的专业评判就是不合格的片子，偏偏人家也能发NATURE，要是换成你我，估计人家是不予理会的。所以组化还得好好做，冰冻片子多切一些或者切剩的标本保存起来不要扔掉了。. g6 p4 N2 C8 c- o8 i2 E8 ~
好好努力吧，个人认为，选哪种方法都关系不大。关键是把组织处理好，把组化做好！

sidalin301

回复 gqs2872022 的帖子6 _  q$ t% |1 o: {3 i* i# A

/ D8 D% I; C3 `% w* L7 {, I! m你能不能说的具体一点？像上面2位说的那样，把自己的经验传授一些，感觉你说的都是大话空话！

sidalin301

回复 sheepthief 的帖子! k# ^/ L4 j6 M5 Q" D$ N1 I0 D7 m
. @( \  ?4 m/ h$ J/ J$ p5 T
再问一下，固定脱水好之后的组织如果不急于做切片该怎么保存？

sidalin301

回复 sheepthief 的帖子! `" `2 n4 o! |& H& q

1 c$ F/ _+ q' q# v3 a再问一下，固定脱水后如果不急于做切片组织该怎么保存？

sidalin301

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* j$ O! Q/ y* C' j6 K6 l再问一下，固定脱水后如果不急于做切片组织该怎么保存？