求胚胎干细胞的冷冻方法

congxiaoran

请教下如何冷冻干细胞 怎么操作和需要哪些液体 谢谢

czzhaozhu

小鼠ES冻存比较简单，而人ES 冻存最好采用程序性降温来冻存，冻存液配方为10%DMSO+80%SR+10%KO-DMEM。

almasun97184

全培养基不好，起码要50%血清或SR（完全培养基中有20%血清）+ g" g" R+ {8 l1 t0 F
其他的成体细胞或细胞系在－80度放半年都可以，hESC最好不要。

sheepthief

另外，放在-80摄氏度后一定是只能一天吗？两天可不可以？有什么影响没? 谢谢

sheepthief

有没有用全培养基+100% DMSO冻存的？

congxiaoran

回复 almasun97184 的帖子
& d- O; c' ?4 J+ E. k- h) p3 J. n1 q( y4 g- X
谢谢

almasun97184

玻璃化冷冻是最高效的，人的ESC的复苏率都可以达到80－90%。价格较高，且麻烦，只适合用建系之初。3 P& L+ \4 O$ P5 T
普通hESC培养冷冻用10%DMSO+40%SR+50%完全培养基。
9 z7 W5 S% D' ]( XmESC培养冷冻用10%DMSO+40%FBS+50%完全培养基。7 U5 b' Z3 f" x) m
程序冷冻最好。没条件的用冷冻盒直接放到－80度冰箱，可以缓慢降温。再不济的4度放两小时，直接丢到－80度也可以，复苏率稍微低一点儿而已。% \) y2 Y. d9 |! g* X: T

nculsa747

回复 yylhxylong 的帖子' x& W2 p: f4 R4 [/ y! @" n* o
: o; w2 u) C0 r  _1 w+ s7 }
我们用的就是CORNING的外旋2ml的管子，没有问题啊。不过你的想法是正确的！

yylhxylong

小小补充一点，如果你把细胞装进小管里面保存在液氮中的话，记得用内旋的小瓶子，用外旋的液氮有可能进去，然后cell就死翘翘了~

nculsa747

回复 congxiaoran 的帖子6 g. B' h1 F9 s. h7 z6 a4 S& @. p
, z/ z) ~; L% c3 h( P, W
不错，是这样的。  it optimized for hESC culture.