请教一下，大家做转基因的怎么来挑取克隆细胞？

xiangchou812

细胞转染后用药物筛选一下，可以长出来克隆，不知大家怎么挑取的？
. m  _# A) `" F: I我用过滤纸法，可能是不得法，细胞不往滤纸上粘，还在皿里。3 t# _" H4 ^) E
欢迎大家讨论，分享自己的经验。

SCNT

最好的方法就是在96孔板或48孔板进行药物筛选，这样很简单就得到单克隆了

xiangchou812

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& w+ q6 B2 p7 Y1 c- U这样用的板子会不会太多了？

SCNT

回复 xiangchou812 的帖子, V/ V" H! }6 T4 `
/ t" C5 {* N9 e8 T' R9 H6 T
虽然用的板子多，但得到的单克隆是相对比较高，也非常容易消化获得单克隆的细胞啊，我们经常用这个方法的

xiangchou812

回复 SCNT 的帖子6 [; w/ i7 M  D3 u8 v. F
7 N7 x. K4 e  T7 d3 K$ s
应该比较纯，好的谢谢你的建议。
. |4 c  O4 j: L0 [4 }另外，你们转化后接种时一般密度多少？

SCNT

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这个没有具体的要求，我们也没有计算过具体密度，也不太现实，肉眼观察，差不多就可以

SCNT

还可以在大皿上筛选，使用微量胰酶消化法收集单克隆细胞

军医

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9 C0 r) }3 t; r& R
5 k* p' {& q- Z' j' [这样筛下来，细胞活力会不会没有用96孔板筛的活力好呀，毕竟加药对细胞的活力还是有影响的，我们实验室有时单克隆就扩增不起来了。

xiangchou812

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克隆扩增不起来是很正常的，毕竟体细胞在体外的扩增代数有限，所以说，筛克隆不难，但是想要筛到好的克隆就不那么容易了。

生物化学zy

我们实验室,是用自己做的克隆环(就是自己用那个口服液的小瓶的瓶环,用钳子掰下来,干热160度2h灭菌),用镊子夹着放在克隆上,刚好把克隆套上,之后不要移动克隆环,然后滴加少许胰酶消化,最后加含血清培养液终止即可.其实克隆环就是起着将克隆固定的作用.很好用的.