请高手帮我看看小鼠MSC,有问题求助

生物化学zy

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$ k7 E! n6 P% i- i& |3 v请各位高手帮帮忙.我用ICR小鼠进行MSC培养,使用全骨髓铺板法,一个小鼠的两个后腿,铺板于6孔板的2个孔.3天后进行全量换液.使用的培养基为
$ a2 \$ Z- i3 s* za-mem(hyclone)+10%FBS(PAA)+1%p/s(PAA)+1%NEA(PAA)+1%Glu(Gibco)
  D/ M% Z. C; s( W# v在第3天全量换液后细胞的状态如下,出现较多的贴壁的纤维状细胞,但是纤维状细胞上还有一层点状的细胞,也是贴壁的.应该是杂细胞
, u( c' P0 Q& O7 {) I" ~7 I  [( e想问一下高手& n+ {& n- i) s1 H; i5 |0 W
1.这些点状的杂细胞,如何去除?是经过细胞不断传代与换液就可以吗?+ O, G! i1 I& d9 b
2.我分的小鼠的MSC第3天的细胞的状态如何?能否长起来
  o/ z8 p$ {7 p7 ^3.若进行原代到p1的传代的话,细胞要生长到何种状态就可以进行,是需要进行1:1传吗?也就是消化下来重新进行铺板.
/ T1 M; T) }, q0 G5 N请求高手给看看0 z7 v- o; e" F+ H$ _1 i

  k- U  _+ b* F1 e- \5 l7 B" s" y  Z
# x% _% W; H  L9 s, x% d
$ K, V1 i  N& `3 A. ~

ndwzf

看你这细胞的状态应能涨起来。
- Z! V3 X1 ~. S! U我们一般三天换液。& y3 r  Z0 a% r* C1 @4 ~
你这个密度一传二较合适，不用1：1传。

bb6120

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" K6 f* X8 A. r  ]3 O1 c7 U% h* U6 B7 \6 Z3 T$ M* f- c
这个就不是很清楚了，MSC细胞分化跟培养基成分也是有关的！原代的MSC一般都是长的比较慢！经过传代之后就快很多！

Learner

感觉细胞形态不太好，不像梭形的成纤维细胞。可能是杂细胞较多。7 s6 X  b8 ~1 X& O4 e* |+ ?

gact

你的protocol是参照哪个paper？

759512199

回复 生物化学zy 的帖子8 F. v# K# h8 a6 l

# d; E9 c- {( @) ?8 N冻存再复苏细胞死掉一下很正常，冻存液和低温本身就对细胞有一定的伤害。操作好的话活细胞率可达95%以上。你也没有必要深究多大板子冻一管，一管冻多少无所谓，关键是你复苏时需要多少细胞。你可以冻存之前把细胞记一下数，然后一个冻存管就冻一定量的细胞，需要时用多少就复苏多少。

生物化学zy

回复 1301918986 的帖子' x9 J* J% a6 Y' d6 i
9 j; b: T& d$ l) s1 g8 N, _  Y
MSC在细胞6孔板中,1孔冻存一管后,复苏6孔板的1个孔,密度会小吗?还是说,冻存的时候细胞就少?如果是这样的话,建议多大板子冻1管?
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生物化学zy

回复 tingwuyu 的帖子4 p' x$ L9 ^! S4 \: Z% n
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MSC在细胞6孔板中,1孔冻存一管后,复苏6孔板的1个孔,密度会小吗?还是说,冻存的时候细胞就少?如果是这样的话,建议多大板子冻1管? : W% R% f. C- ^  F* c4 K

生物化学zy

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2 C5 J' J! s+ J3 k2 K( iMSC在细胞6孔板中,1孔冻存一管后,复苏6孔板的1个孔,密度会小吗?还是说,冻存的时候细胞就少?如果是这样的话,建议多大板子冻1管?

生物化学zy

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谢谢,了解了