WB条带丑陋，求鉴定，求指点，煮样不充分orDNA粘稠？

7ubo

2011-6-13 20:20 上传

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如题，6cm的293T用200ul loading buffer裂解的，煮过以后离心是有沉淀的。

lifangamanda

回复 细胞海洋 的帖子
& f. K9 v) k5 K6 D1 E1 x* A3 b+ A
" K* F( E+ U* G( s多谢海洋哥！

7ubo

回复 chb611301 的帖子
1 T& d% S  p/ Q2 ?4 |7 R" D: K% N- e
APS少加点是不是比较好？

7ubo

回复 wenyangapple 的帖子( Z: d* N9 p5 |6 ~
" w: ?. k8 ^. M6 ?
长满的6cm的皿的293T用200ul的SDS loading buffer裂解的，是不是加少了？

chb611301

我觉得先检查一下配的胶，是不是SDS和Aps的问提，胶凝的情况。其次是样品处理一般都是煮样15vmin，都没有问题了。我们常规经验脱脂牛奶封闭要2小时会比较好一些。二抗稀释浓度一般都是1:5000，到1:8000都可以的。

细胞海洋

回复 lifangamanda 的帖子8 V) R$ S, x  Y* a' i8 O- o

4 p- Z  ^; F  q点击Zhenhua版回复帖中的回复按钮发言 像我这样 否则他不一定会看到

pheebs

zhenhua 发表于 2011-6-13 21:25   u+ Q" T) _& a, Y! P, i$ [
呵呵，怎么能说自己的data很丑陋呢？
; j5 e5 q: O/ n. f; {1 C6cm的293T用200ul loading buffer裂解。那你每个泳道上了多少ul呢？) T, P& V6 J2 I5 e
...

# E1 s! a2 c; @2 X煮这么久，第一次听说。。。

wenyangapple

回复 hndxws 的帖子# i; u" W) t+ _& _
! a( E! w& E' Y$ u
我觉得你这个是蛋白没有提出来，或者提出来的蛋白降解的比较严重。

wenyangapple

回复 7ubo 的帖子
: i# R. @0 Z! B- b' l$ Z* {! z/ \# m4 \1 F5 ^: z$ ^9 F' l/ W
右侧是好的结果吧？左侧比较糟糕的data最大的可能性没有裂解开，从上面那些黑色的渣滓量比较的大但是下面条带却很细能看出来。裂解buffer的问题可能是pH不对，或者是SDS or NP-40之类的加的不对。

lifangamanda

Zhenhua版主，煮样温度，温度？？？谢谢！