求救，转染的问题

always_wp

要是向ES或者IPS内再转染一个目的基因，有没有谁做过啊 ，给些建议啊~多谢了

wwy551

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! z  N$ M3 `" k7 }# S* O# o) `9 f6 @1 W
我没用G418筛选过，你可以自己先摸一个能杀死没转基因的ES的最小G418浓度~

yangpan521

磷酸钙法和脂质体法效果基本一致，转过R1品系的，是用慢病毒感染的，效果还不错。

pla269

是的，一般都是这样0 O: s2 p* T  H! l! c

always_wp

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, u- O' f$ E& |" V  g1 m0 a' G/ q* v& Q9 S
你好，我还想问一下，如果要是用G418筛选，那筛选的浓度范围是在多大的浓度范围内进行筛选的呢，必须要从100-1000ug/ml之内，每间隔100来筛选么。- Z, N+ Q4 l0 J
谢谢啊7 M1 Z$ I0 ?1 S& ^$ ~& W, c

always_wp

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1 K( C8 J! u/ e9 j' n' m( ^+ P0 L; Y( `  L. @/ J/ F4 m
你好，我还想问一下，如果要是用G418筛选，那筛选的浓度范围是在多大的浓度范围内进行筛选的呢，必须要从100-1000ug/ml之内，每间隔100来筛选么。6 r7 r) H% v% r6 ^! s$ |# b
谢谢啊2 [" O/ d) u* R" ]

sdjjfangfang

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4 K" b' J) u9 g7 @& A( s2 E( B
' p9 `) I! F0 R& M; ?' z6 J把ESZ转到在Matrigle 上培养呀，之前可以考虑用沉降或者是低速离心的方法去除MEF

always_wp

回复 wwy551 的帖子1 V( B# y  g  o% C# q4 M
# q; S0 b6 M& }8 V! j, U
恩，明白啦 3Q

wwy551

回复 always_wp 的帖子8 x) o9 J7 ^7 T+ w/ r, h/ s* x
2 e  n! l: r' G' J& x
这个影响不大，因为之前悬浮转染，完了还要在把ES转到FEEDER上去过夜感染。传代的时候ES本来就是连着FEEDER一起传代，传几代估计就更没什么影响了。

pla269

稳转，一般都用病毒，我做的是慢病毒，感染效率高，免疫原性低，做好包装质粒mdlg、rsv/rev、vsvg，再加上你的目的基因，参照invitrogen公司的方案用lip2000和opti-mem感染293细胞，收3次48小时以内的病毒，然后就可以用病毒上清感染你的目的细胞了，感染效果不好的话，就把病毒浓缩一下