关于转染问题

苏眉1989

我记得我们实验室的战友们都说贴壁细胞特别是293T比较好转染，但记得干细胞之家中有人推荐把细胞吹到悬浮时转染，不大明白，特来请教各位高人？另可不可以问下关于那种转染方法适合哪种类型的细胞转染，简单原因，谢谢！

goast8

记得有个病毒转染293t的kit就是悬浮转染。! w5 U3 g/ Z! K# y4 p0 ^3 @! v* @* Z! |
我在进行大量相同条件孔板转染时，会将细胞消化下来转染再统一种板，这样比较省力，同时更加均匀，转染效率也差不多，

yuyan

回复 wwy551 的帖子
* m! T, d; `% l8 N9 b  ?& O$ D' I; q0 j; n
好的，非常感谢~~

daviddow

293T贴壁转染就是了，那个不是什么技术

aminhair

路过，学到新东西了。

huangcong1988

贴壁细胞特别是293T比较好转染？Are u kidding me ?貌似293T贴壁不是很强，而且易成团，虽然293T转染效率是挺高。干细胞之家中有人推荐把细胞吹到悬浮时转染，这个我真不知道怎么说了，因为在做293T转染的时候，一般是贴壁转染，而且之前我做的时候，由于在混匀的时候把细胞摇起来了，效果很不好，所以混匀时摇轻。

wnavy200299

离心转染---第一次听说啊~~~~受教了！
* u/ E, E" H; t& y4 Q不知效率比普通（正常）转染高多少？或者说高不高？高多少？! \% S  a4 F* N! I0 x9 h6 A
因为效率是第一的，在效率是一致的情况下，过程越简单越好！

eley

一般转染的时候不要把细胞给悬浮起来，因为这样也是对细胞的一种伤害，应该把把细胞静置在最佳状态。2 J4 m* A( K( Z1 [, Q7 }# Z
如果是使用 Lipo，那就直接按照Protocol上说的就可以，+ y- a0 K3 N* B6 O/ o7 r+ H$ M
如果是钙转，我现在一直使用的是BES，而且我自己的小窍门是就是，在加入质粒之后，不要急于6-8小时换液，而是要往里面加入培液，就是12小时加一次，24小时加一次，然后在进行换液，或者收蛋白。
' `+ U  y7 n4 e- E8 K2 H1 S因为细胞是吸收沉淀颗粒，如果换液的话，会把沉淀给吸走，如果只加培液，这样沉淀还在，长出新的细胞还可以继续接受沉淀。所以转染效率高。
1 h5 @1 a, H9 ?希望对你有帮助~~~

wwy551

回复 yuyan 的帖子
  F) N3 L5 x6 Q) X% b, k9 F
9 [( Z  ^* M. @0 v9 w2 h  b0 n, V5 i" x384孔板？这个还真没见过，我们实验室最多也就用96孔板。离心过程在不在细胞间不重要，当然还是要保证无菌。转速2500RPM，90MIN，33℃。