求原因。PCR怎么会多跑出一个条带？有图......

熊猫猫

今天第一次跑PCR，没用内参，只跑了目的基因(217kb)，左边是我跑的结果，为什么会多出一个条带来，而且比目的基因还亮些？
7 ?3 U/ T: R5 o$ w. l% b0 f还请给位指点啊......

snickle

建议设一个阴性对照试一下看看

殆死悲爱

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" T  f- s4 D% p
8 B; G  w( Y: N) G4 m6 g非特异性杂带，可能是引物设计的有问题。我只是个人猜测，因为不知道你的模板是啥？

熊猫猫

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9 ]# ?5 C0 Q1 H+ h1 l! d- Y3 l% T% y" U
请问什么是阴性对照呢？

dulaiyouyu

看来引物没设计好的样子。跑胶还得有个阴性和阳性对照才好啊。。。

熊猫猫

回复 dulaiyouyu 的帖子' K9 B; }5 R% b. s7 u2 R

/ E, L8 h. T4 J4 O8 G请问什么是阴性对照呢？

snickle

阴性对照，不加模板，和你的样品一起扩增跑胶

熊猫猫

回复 snickle 的帖子; A  Y' \, [2 `* a- n

! r" X6 t( K8 |3 ]- K: x7 F刚才在网上也看了下，不知道对不对' w) ^( v% T' @8 B6 v! {
阴性对照：逆转录时不加目的RNA，用水代替( E6 W8 t" r% g2 K6 f
阳性对照：逆转录时加目的RNA

jun8013

引物二聚体？

jun8013

应该就是引物二聚体