试着提了两次大鼠原代BMSC，均以失败告终，前辈们给些建议吧，万分感谢

taoli10000

提取的是大鼠的BMSC 细胞，腿上的两根骨头都取了，按照别人的一般操作方法进行的，直接用培养基冲洗骨髓，然后两根骨头分装至两个T25的培养瓶，所用的培养基是GIBICO买的低糖的500ml的，然后自己加的血清（10%），双抗（1%），放置三天后，有些是伸展贴壁的非常少，可以数的清，有的是贴壁的细胞都是圆圆的很多，不像是所要的细胞，感觉这些圆的细胞抑制那些伸展开的细胞生长，有些伸展的细胞较多些，呈集落生长，然后堆叠起来，但是总体上数量还是不够多，所有的细胞传代后均是同样的命运：不贴壁啊！传代消化差不多两分钟吧，然后轻敲瓶底，轻轻吹打几次。。。/ W- M: s: C- [* f# b3 j4 u( M3 f+ |
由于条件限制，不能拍照，不知道问题到底出在哪里，在这里请教大家，希望给点建议，打算再尝试提取两次，又担心再次重复这样的问题。。。整个操作过程是看过别人有经验的人之后做的，但是就是养不起来啊！

殆死悲爱

. i! ~5 Q0 d% m9 W4 r9 v

$ p5 n/ Y! r9 l2 ]回复 taoli10000 的帖子
4 }$ ?4 e: E' N9 L, f$ n2 E! L3 D! G- W
MSC比较难养，易老化，大鼠的更难。MSC应该是单层梭状，圆形贴壁的细胞应该是造血干。你可以在培养基中加点L-谷氨酰胺，15%FBS试试

wnavy200299

小鼠的更难养啊~~~~~~~~~~6 U& q1 |% ?9 g
大鼠还好点~听别人说的，呵呵

taoli10000

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& u$ M/ h- e8 b7 I! q/ g6 Z( i) P" M) e4 s4 |  ]
嗯，买的培养基里面有谷氨酰胺，但是那个东西很容易降解

taxuewuge

我做的也是大鼠的BMSC，你看一下是不是培养基的PH出问题了。而且培养基放在4度冰箱里谷氨酰胺2周左右就会分解掉，我采用的方法是分装在离心管里然后冻存，用的时候再提前一天解冻。如果有细胞堆叠，很有可能是细胞没有打散，建议先用5ml的注射器打散后再用1ml的打散。本人愚见，仅供参考。

luoziwei

增加骨髓液的密度，或许能行

ivantanqi

殆死悲爱 发表于 2011-6-29 20:18 ! S. q' X4 r/ J
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: s/ G* @. X4 G, Z( R2 _6 SMSC比较难养，易老化，大鼠的更难。MSC应该是单层梭状，圆形贴壁的细胞应该是造 ...

: d/ ?2 e5 j! c: e0 l" g- Y这位兄弟提到的圆形贴壁的细胞是造血干细胞，有什么根据啊？

viv2005

回复 殆死悲爱 的帖子! o9 t. \- f3 W9 y

. {3 N7 P' [1 R/ i+ C1 Z& c请问谷氨酰胺是什么作用呢，倒是在实验室看见有100X的好像，没想到跟MSC还有关系啊

sherolily

谷氨酰胺有利于细胞的生长。在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而逐渐死亡，所以要添加谷氨酰胺，而且，放在4度，两周就分解了，需要重新配制。

殆死悲爱

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8 q. B4 K/ P6 h' n; R; r5 w5 y# L+ D3 f; O/ Y8 ?
细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，谷氨酰胺缺乏要导致细胞生长不良甚至死亡