试着提了两次大鼠原代BMSC，均以失败告终，前辈们给些建议吧，万分感谢

taoli10000

提取的是大鼠的BMSC 细胞，腿上的两根骨头都取了，按照别人的一般操作方法进行的，直接用培养基冲洗骨髓，然后两根骨头分装至两个T25的培养瓶，所用的培养基是GIBICO买的低糖的500ml的，然后自己加的血清（10%），双抗（1%），放置三天后，有些是伸展贴壁的非常少，可以数的清，有的是贴壁的细胞都是圆圆的很多，不像是所要的细胞，感觉这些圆的细胞抑制那些伸展开的细胞生长，有些伸展的细胞较多些，呈集落生长，然后堆叠起来，但是总体上数量还是不够多，所有的细胞传代后均是同样的命运：不贴壁啊！传代消化差不多两分钟吧，然后轻敲瓶底，轻轻吹打几次。。。
+ k) J) p/ `. m" {' e1 O, B由于条件限制，不能拍照，不知道问题到底出在哪里，在这里请教大家，希望给点建议，打算再尝试提取两次，又担心再次重复这样的问题。。。整个操作过程是看过别人有经验的人之后做的，但是就是养不起来啊！

殆死悲爱

2 g" H8 k$ M- H# m; }
& C2 f4 ]' o( v7 _4 X7 @回复 taoli10000 的帖子$ m, M6 M& o" p9 l
; U* X) H* d; d1 ?
MSC比较难养，易老化，大鼠的更难。MSC应该是单层梭状，圆形贴壁的细胞应该是造血干。你可以在培养基中加点L-谷氨酰胺，15%FBS试试

wnavy200299

小鼠的更难养啊~~~~~~~~~~
3 o$ k  ^2 E" m5 M( @大鼠还好点~听别人说的，呵呵

taoli10000

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8 o3 B: t  p1 l2 _5 Q, L1 x) f. i; [
* l. u/ O4 Y- S7 q/ X! ^$ ^嗯，买的培养基里面有谷氨酰胺，但是那个东西很容易降解

taxuewuge

我做的也是大鼠的BMSC，你看一下是不是培养基的PH出问题了。而且培养基放在4度冰箱里谷氨酰胺2周左右就会分解掉，我采用的方法是分装在离心管里然后冻存，用的时候再提前一天解冻。如果有细胞堆叠，很有可能是细胞没有打散，建议先用5ml的注射器打散后再用1ml的打散。本人愚见，仅供参考。

luoziwei

增加骨髓液的密度，或许能行

ivantanqi

殆死悲爱 发表于 2011-6-29 20:18
+ O6 I3 s2 C; e* m7 Q回复 taoli10000 的帖子, b/ n1 ~/ ?, _8 z5 Z9 P! J
" z6 S, l+ G5 Q5 u/ K8 O
MSC比较难养，易老化，大鼠的更难。MSC应该是单层梭状，圆形贴壁的细胞应该是造 ...

( a9 i+ g. i- G" F) Q  {& ^1 S
这位兄弟提到的圆形贴壁的细胞是造血干细胞，有什么根据啊？

viv2005

回复 殆死悲爱 的帖子8 [7 t# j+ F( @/ F9 i2 i

; `) \8 L3 U3 a! R& p. c) d请问谷氨酰胺是什么作用呢，倒是在实验室看见有100X的好像，没想到跟MSC还有关系啊

sherolily

谷氨酰胺有利于细胞的生长。在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而逐渐死亡，所以要添加谷氨酰胺，而且，放在4度，两周就分解了，需要重新配制。

殆死悲爱

回复 viv2005 的帖子
) e: r6 R3 E& [7 v4 `, ?+ }3 y5 u. s0 ^$ Y
细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，谷氨酰胺缺乏要导致细胞生长不良甚至死亡