为啥iPS培养液体黄的这么快？

dilal

最近养小鼠的iPS细胞，饲养层培养，培养液用的是血清替代物配制（Knockout SR）的培养基（都是iPS细胞专用的），但是传代后不到一天液体就变黄了，换完液后半天再去看，液体又变黄了。镜下看iPS细胞长的也并不是很明显，怀疑跟孵箱有关，换了孵箱养结果一样。8 W" F% |5 {/ d+ t
一直搞不懂是怎么回事？细胞长得也不是很快，为啥液体老是变黄？请高人指点。

fananran2003

你培养液是不是用的knock-out DMEM F12,( _3 _- B9 k' Y3 i9 [

bunny19870512

测下PH？

微微一笑

一、可能是污染。5 C2 O3 t0 i/ o
二、培养箱用了多久，最近有没有调校。我们实验室之前一个培养箱就是这种情况，设置5%CO2，显示也是5%CO2，但是工程师后面来测时发现实际CO2是2.8%。
0 {/ E1 J" J+ \4 |$ ^三、DMEM F12如果没有调过PH，而直接配出来的培养液是偏酸性的。

hygene

1、测/调PH值；
. f' n0 [' D9 ~1 z2 C4 w/ }/ Y2、考虑支原体污染，如果是那就趁早重来吧。

dilal

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. X/ C. f0 [! q! Y9 j, B
% o3 s8 W& x9 l# _! d# ]是Knockout DMEM

dilal

回复 bunny19870512 的帖子. K% O& n, L/ v& ~  E$ k! D0 |4 |
" H, R  m9 D5 Q+ w7 T2 m% _
测过PH值，7.0

dilal

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# r' x3 [4 S: ?3 H不是污染的问题，仅仅是液体变黄，也不浑浊，而且镜下细胞状态不错，没有发现有污染的迹象。

cicadacjk

knock out serum replacement配的培养基在co2中平衡后就是黄色的，你估计加了15%，放一会应该就黄了。

dilal

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+ J  F. ~0 P  \& o. ?* {0 J) @2 r' L2 _0 s. w. Y3 A. x+ x1 v
是的，我们配制的浓度是15%，按照广州生物医药与健康研究所提供的配方配制的，细胞也是在他们那里买的。但是有一点特别怪，我们用这种液体养ESC细胞时（没有饲养层），液体也不变黄，但是养iPS细胞时就变黄。不知道你们有没有出现这种情况，原因在哪里？