为啥iPS培养液体黄的这么快？

dilal

最近养小鼠的iPS细胞，饲养层培养，培养液用的是血清替代物配制（Knockout SR）的培养基（都是iPS细胞专用的），但是传代后不到一天液体就变黄了，换完液后半天再去看，液体又变黄了。镜下看iPS细胞长的也并不是很明显，怀疑跟孵箱有关，换了孵箱养结果一样。
& N% |! a7 U; d0 u+ b一直搞不懂是怎么回事？细胞长得也不是很快，为啥液体老是变黄？请高人指点。

fananran2003

你培养液是不是用的knock-out DMEM F12,* x. U) J- P: h7 i% p

bunny19870512

测下PH？

微微一笑

一、可能是污染。
7 j$ U+ i3 C) ^* k4 E二、培养箱用了多久，最近有没有调校。我们实验室之前一个培养箱就是这种情况，设置5%CO2，显示也是5%CO2，但是工程师后面来测时发现实际CO2是2.8%。' ?6 O+ h" I2 t9 C# g, n3 [9 n
三、DMEM F12如果没有调过PH，而直接配出来的培养液是偏酸性的。

hygene

1、测/调PH值；& G! ]/ i  Z6 j$ c4 X! |
2、考虑支原体污染，如果是那就趁早重来吧。

dilal

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$ D7 S+ U. L* O2 Q1 H0 H+ e: L1 h  M5 P% R6 h, _3 U1 t0 P
是Knockout DMEM

dilal

回复 bunny19870512 的帖子4 ]8 a4 q  A& A
+ a1 h! H2 _  U- d/ ^- y3 g
测过PH值，7.0

dilal

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# X# E0 b7 o5 Z8 u- Q7 u( N2 l% ^2 V8 R7 k
不是污染的问题，仅仅是液体变黄，也不浑浊，而且镜下细胞状态不错，没有发现有污染的迹象。

cicadacjk

knock out serum replacement配的培养基在co2中平衡后就是黄色的，你估计加了15%，放一会应该就黄了。

dilal

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8 F& Y' h' ~6 \+ M! B3 D. f& d/ S1 `
是的，我们配制的浓度是15%，按照广州生物医药与健康研究所提供的配方配制的，细胞也是在他们那里买的。但是有一点特别怪，我们用这种液体养ESC细胞时（没有饲养层），液体也不变黄，但是养iPS细胞时就变黄。不知道你们有没有出现这种情况，原因在哪里？