免疫荧光染色用PBS和TBS有无区别

深海鱼

做细胞的免疫荧光染色，有用PBS有用TBS的，二者都是缓冲液，不知有啥区别，哪个更好一点？另外PBS必须是细胞培养的PBS吗？自己配制可不可以，会影响结果吗？请各位大侠不吝赐教，感激不尽

menghy

我个人认为PBS还是要好一些，因为TBS里面含有HCL对实验肯能会有一些影响。做免疫荧光的话一般自己实验室配制的PBS就可以，细胞培养级别就是纯度更高一些，你用分析纯的试剂配制PBS完全可以满足实验的需要了！

深海鱼

回复 menghy 的帖子
7 V) s% _1 y" S5 e7 B0 U' J( Q/ a9 D  g5 j. O: O5 O
谢谢大侠指教( m7 V$ x9 z4 Z( B) J
不过网上PBS的配制方法有很多，难以取舍，大侠能否告知您的配方？

oucflora

细胞的免疫荧光染色，我都用PBS，因为细胞培养用品都是用超纯水配制，所以做细胞的免疫荧光染色时用的PBS我也是用的超纯水，给你一个配方：
4 V% g0 ?6 m$ j6 h0 c2 UKCl                          0.2g/L/ T" y' w" y* f$ R/ W" o
KH2PO4                  0.2g/L2 S4 J5 ]( F4 x' w
NaCl                        8.0g/L0 t, K/ E: c( S2 p2 m& o8 a6 m* |
Na2HPO4.7H2O      2.16g/L
; Q0 x4 o: k# g. N: g用超纯水定容到1L 即可；最好是现用现配，4摄氏度保存。# y6 a' m" @6 E( \- \  G

8 k# Q+ D* z7 M$ G/ D3 d2 s  

oucflora

以上配方中所列的试剂用国产的分析纯即可。如果没有超纯水，也可以用三蒸水代替。

linlicau

没什么区别。2 a; K+ n$ k( v' ~+ s, x, `' H

9 w' D2 O$ `! B: V  i& U* \4 [PBST和TBST的区别一般在做磷酸化实验的过程中要用TBST，因为PBST有磷酸，会影响结果。0 E+ o! U+ U6 y- v
! q/ b8 ]8 v) V+ i4 r- w. s
Immunostaining用什么都无所谓。
+ U5 W; `1 U  }/ L  K: G8 M( w7 [" a* s6 u9 Y; ^) _
PBS配方：
: }/ t9 g6 G) |1 q  ?1 s: ehttp://www.ihcworld.com/_protocols/washing_buffers/pbs.htm

oucflora

+ Z% b7 O/ s3 l1 I

oucflora 发表于 2011-7-28 11:42
* N; @( v& o$ l  _* z细胞的免疫荧光染色，我都用PBS，因为细胞培养用品都是用超纯水配制，所以做细胞的免疫荧光染色时用的PBS我 ...

) k7 G4 P- V* v  `+ }2 [  _. Y% j+ d6 l) d0 M* ]$ y
其实关于PBS的配方问题我以前查阅过很多资料，不过在刘爱平主编的《细胞生物学荧光技术原理和技术》（中科大出版社出版）这本书中介绍说PB（phosphate buffer）为磷酸缓冲溶液，只有Na2HPO4和NaH2PO4两种成分。而PBS（phosphate buffered saline）称为磷酸缓冲生理盐水，是在PB的基础上添加了NaCl等成分。
8 N2 _( @& N) s+ F5 Q) _! u; n在PB和PBS的选择上，个人认为对于活细胞的漂洗工作最好用PBS，细胞被固定后就没有太多的要求了。6 u7 ?' V) g& H+ U8 V. X  q
上面我列举的PBS的配方来源于薛庆善的《体外培养原理与技术》这本书。咱们论坛有电子版，下载地址：http://www.stemcell8.cn/thread-36261-1-1.html

menghy

oucflora 发表于 2011-7-28 11:42
0 _7 v+ T7 u% n/ o6 X& T( r细胞的免疫荧光染色，我都用PBS，因为细胞培养用品都是用超纯水配制，所以做细胞的免疫荧光染色时用的PBS我 ...

; n7 U; {  ]  v- v. g我们PBS的配方和这位坛友的是一样的！后面有事情就没有来得及回，不好意思！

ljs

回复 linlicau 的帖子1 ]6 l' F" D# J# ~

" ~- o: H+ R' \. bPBST中的T是什么意思？

linlicau

ljs 发表于 2011-7-28 16:58 5 J- Y. |! t# M( N) p
回复 linlicau 的帖子: X3 \4 h3 g6 \& ?8 y
* N& f+ y$ X' I. G3 x
PBST中的T是什么意思？

3 v0 s- N6 M; }1 }9 G
你在洗的时候不是用PBS或者TBS洗，而是使用加了Tween-20的PBS或者TBS洗。一般一升的PBS/TBS加1ml Tween-20。充分摇匀后使用。