免疫荧光染色用PBS和TBS有无区别

深海鱼

做细胞的免疫荧光染色，有用PBS有用TBS的，二者都是缓冲液，不知有啥区别，哪个更好一点？另外PBS必须是细胞培养的PBS吗？自己配制可不可以，会影响结果吗？请各位大侠不吝赐教，感激不尽

menghy

我个人认为PBS还是要好一些，因为TBS里面含有HCL对实验肯能会有一些影响。做免疫荧光的话一般自己实验室配制的PBS就可以，细胞培养级别就是纯度更高一些，你用分析纯的试剂配制PBS完全可以满足实验的需要了！

深海鱼

回复 menghy 的帖子
1 a! `) O7 y0 J  V/ o$ n. @  S) E# A0 u- b& G, g2 P
谢谢大侠指教4 @) o7 _$ C/ t' o" D# y
不过网上PBS的配制方法有很多，难以取舍，大侠能否告知您的配方？

oucflora

细胞的免疫荧光染色，我都用PBS，因为细胞培养用品都是用超纯水配制，所以做细胞的免疫荧光染色时用的PBS我也是用的超纯水，给你一个配方：. ?  e. ?) t. O0 E# Z  C* E9 {
KCl                          0.2g/L% O# B, H3 V* `4 p: Y9 q1 Z6 n
KH2PO4                  0.2g/L1 u% g) f% E" J2 Y
NaCl                        8.0g/L# @  A9 k8 m- V. \! s# _
Na2HPO4.7H2O      2.16g/L- O8 F2 {& G9 r
用超纯水定容到1L 即可；最好是现用现配，4摄氏度保存。
8 v; g1 D+ _+ U  ^6 e( r' A, L( a0 d/ E3 m
  

oucflora

以上配方中所列的试剂用国产的分析纯即可。如果没有超纯水，也可以用三蒸水代替。

linlicau

没什么区别。9 ?2 r/ B. _2 o+ z7 `5 o
9 @% E, ]2 j6 F; U
PBST和TBST的区别一般在做磷酸化实验的过程中要用TBST，因为PBST有磷酸，会影响结果。
7 C% O" N8 Q- f' Z/ p9 H  N3 r- n. \- B" C2 Q7 z  d3 a# s$ S
Immunostaining用什么都无所谓。
+ M4 O8 F2 A: T: Y
& N  r* I+ j# APBS配方：
, O! B. u) ~4 r0 b% w7 K6 ?0 phttp://www.ihcworld.com/_protocols/washing_buffers/pbs.htm

oucflora

* C8 k8 n4 T/ l* @- V/ Q( e" d3 C

oucflora 发表于 2011-7-28 11:42
& Y" b, R) ~+ Z& s9 ]# c细胞的免疫荧光染色，我都用PBS，因为细胞培养用品都是用超纯水配制，所以做细胞的免疫荧光染色时用的PBS我 ...

9 @1 A, ~/ ?% n: g% |% }0 a& g- l' @+ S9 v- N  ?7 t7 J
其实关于PBS的配方问题我以前查阅过很多资料，不过在刘爱平主编的《细胞生物学荧光技术原理和技术》（中科大出版社出版）这本书中介绍说PB（phosphate buffer）为磷酸缓冲溶液，只有Na2HPO4和NaH2PO4两种成分。而PBS（phosphate buffered saline）称为磷酸缓冲生理盐水，是在PB的基础上添加了NaCl等成分。
" D5 u0 a$ h& n( b7 G在PB和PBS的选择上，个人认为对于活细胞的漂洗工作最好用PBS，细胞被固定后就没有太多的要求了。0 u8 t$ k+ o; |& T2 B6 R! N7 k
上面我列举的PBS的配方来源于薛庆善的《体外培养原理与技术》这本书。咱们论坛有电子版，下载地址：http://www.stemcell8.cn/thread-36261-1-1.html

menghy

oucflora 发表于 2011-7-28 11:42 8 v9 }" K. e+ I+ ~9 G% f
细胞的免疫荧光染色，我都用PBS，因为细胞培养用品都是用超纯水配制，所以做细胞的免疫荧光染色时用的PBS我 ...

5 K; z+ P' Q2 i  w: N: i* y9 b我们PBS的配方和这位坛友的是一样的！后面有事情就没有来得及回，不好意思！

ljs

回复 linlicau 的帖子6 J- ?) Z8 \* I
9 l# n; p' X6 e3 K
PBST中的T是什么意思？

linlicau

ljs 发表于 2011-7-28 16:58
: t" n- R- ]+ g  u  J6 [' R5 @  }回复 linlicau 的帖子# L/ m/ i! u0 ?, K
7 _+ P6 H* ~8 l$ ~; F
PBST中的T是什么意思？

+ _1 ?% a( J! M你在洗的时候不是用PBS或者TBS洗，而是使用加了Tween-20的PBS或者TBS洗。一般一升的PBS/TBS加1ml Tween-20。充分摇匀后使用。