免疫荧光染色用PBS和TBS有无区别

深海鱼

做细胞的免疫荧光染色，有用PBS有用TBS的，二者都是缓冲液，不知有啥区别，哪个更好一点？另外PBS必须是细胞培养的PBS吗？自己配制可不可以，会影响结果吗？请各位大侠不吝赐教，感激不尽

menghy

我个人认为PBS还是要好一些，因为TBS里面含有HCL对实验肯能会有一些影响。做免疫荧光的话一般自己实验室配制的PBS就可以，细胞培养级别就是纯度更高一些，你用分析纯的试剂配制PBS完全可以满足实验的需要了！

深海鱼

回复 menghy 的帖子
% e  U+ ]' ?4 X" m) T: @" v( M3 h1 @$ B; a  i7 g3 k
谢谢大侠指教
0 X5 Z' z5 |6 s) b不过网上PBS的配制方法有很多，难以取舍，大侠能否告知您的配方？

oucflora

细胞的免疫荧光染色，我都用PBS，因为细胞培养用品都是用超纯水配制，所以做细胞的免疫荧光染色时用的PBS我也是用的超纯水，给你一个配方：
7 b8 M& E$ B% X) F: D5 `KCl                          0.2g/L
* B5 ?/ K" O3 ^( A) X  G5 _& pKH2PO4                  0.2g/L
( N! _! t3 M! _! z1 k' f; k3 ?/ yNaCl                        8.0g/L
0 ^) D9 X$ {, |$ d! H7 T- ENa2HPO4.7H2O      2.16g/L0 [  b! a7 l  Q" `9 N9 B
用超纯水定容到1L 即可；最好是现用现配，4摄氏度保存。, j+ `8 ]( M# L
" T1 @) t- S# r  x& M
  

oucflora

以上配方中所列的试剂用国产的分析纯即可。如果没有超纯水，也可以用三蒸水代替。

linlicau

没什么区别。6 S- ?! B4 v, ^4 h
7 J0 A8 {  |! i
PBST和TBST的区别一般在做磷酸化实验的过程中要用TBST，因为PBST有磷酸，会影响结果。% e5 \, X2 A$ a/ Y: |. ^

1 Z# M# P& D1 l! A! H8 SImmunostaining用什么都无所谓。
2 D+ m0 S# R0 p6 j- C9 T: o* O
6 `$ o4 m) g% T0 VPBS配方：& r9 o2 O1 z% f8 y2 x0 `
http://www.ihcworld.com/_protocols/washing_buffers/pbs.htm

oucflora

+ L( u1 X3 ]) i

oucflora 发表于 2011-7-28 11:42 ; I% }: a6 B6 a7 k, F, v
细胞的免疫荧光染色，我都用PBS，因为细胞培养用品都是用超纯水配制，所以做细胞的免疫荧光染色时用的PBS我 ...

8 v4 p$ w. L. Z9 O& B

. o3 I9 N1 Q+ z& q, W; z; L/ D8 J其实关于PBS的配方问题我以前查阅过很多资料，不过在刘爱平主编的《细胞生物学荧光技术原理和技术》（中科大出版社出版）这本书中介绍说PB（phosphate buffer）为磷酸缓冲溶液，只有Na2HPO4和NaH2PO4两种成分。而PBS（phosphate buffered saline）称为磷酸缓冲生理盐水，是在PB的基础上添加了NaCl等成分。6 A+ s" ~- Z/ q1 g
在PB和PBS的选择上，个人认为对于活细胞的漂洗工作最好用PBS，细胞被固定后就没有太多的要求了。
4 r/ B7 j# e. Y$ C' ^8 T; N- u上面我列举的PBS的配方来源于薛庆善的《体外培养原理与技术》这本书。咱们论坛有电子版，下载地址：http://www.stemcell8.cn/thread-36261-1-1.html

menghy

oucflora 发表于 2011-7-28 11:42 ! y/ ]. {- a0 ?$ C% {3 o1 Q) n
细胞的免疫荧光染色，我都用PBS，因为细胞培养用品都是用超纯水配制，所以做细胞的免疫荧光染色时用的PBS我 ...

( S' W) Q- v& M
我们PBS的配方和这位坛友的是一样的！后面有事情就没有来得及回，不好意思！

ljs

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8 B" K" J* ]2 e# S5 h7 a5 A  l( Z# D$ j  v% X3 Y' I
PBST中的T是什么意思？

linlicau

ljs 发表于 2011-7-28 16:58
7 U9 k' q! Y) ?! |$ `回复 linlicau 的帖子# ]6 Q( k1 y6 p$ w: s  i& c4 C) y6 p

, {# \& o, g" S# t4 l9 y& ?+ W: ~PBST中的T是什么意思？

6 M% U; u: B# j$ m3 j. X; J2 t
你在洗的时候不是用PBS或者TBS洗，而是使用加了Tween-20的PBS或者TBS洗。一般一升的PBS/TBS加1ml Tween-20。充分摇匀后使用。