免疫荧光染色用PBS和TBS有无区别

深海鱼

做细胞的免疫荧光染色，有用PBS有用TBS的，二者都是缓冲液，不知有啥区别，哪个更好一点？另外PBS必须是细胞培养的PBS吗？自己配制可不可以，会影响结果吗？请各位大侠不吝赐教，感激不尽

menghy

我个人认为PBS还是要好一些，因为TBS里面含有HCL对实验肯能会有一些影响。做免疫荧光的话一般自己实验室配制的PBS就可以，细胞培养级别就是纯度更高一些，你用分析纯的试剂配制PBS完全可以满足实验的需要了！

深海鱼

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9 }( Y& [, {! q/ y5 E/ a% \! {
( Y# _! t( i0 i9 z谢谢大侠指教, x6 [! U7 k" \
不过网上PBS的配制方法有很多，难以取舍，大侠能否告知您的配方？

oucflora

细胞的免疫荧光染色，我都用PBS，因为细胞培养用品都是用超纯水配制，所以做细胞的免疫荧光染色时用的PBS我也是用的超纯水，给你一个配方：+ V/ h6 K( N  r3 X4 v
KCl                          0.2g/L
9 B3 G! T& m" q! @KH2PO4                  0.2g/L0 J" X7 Z- D' V2 ~. ~) d
NaCl                        8.0g/L6 y9 q* U7 @; I
Na2HPO4.7H2O      2.16g/L0 I6 R5 y" D6 w4 E
用超纯水定容到1L 即可；最好是现用现配，4摄氏度保存。
& L8 g- z$ _) n. r. K+ [! e
! B( u& }' Y3 [7 O5 d5 p4 k& t  

oucflora

以上配方中所列的试剂用国产的分析纯即可。如果没有超纯水，也可以用三蒸水代替。

linlicau

没什么区别。% K9 x$ n5 r* L* ?1 c7 Z2 i& |- p

- C* Y: r6 ^- T2 UPBST和TBST的区别一般在做磷酸化实验的过程中要用TBST，因为PBST有磷酸，会影响结果。" J0 B# _/ v7 N( A
+ J5 V$ h; T5 L2 F/ E4 j4 T, ?
Immunostaining用什么都无所谓。! T  W; `6 v7 a6 E* Q% u' f

, Z' R. t# E" |PBS配方：: u# ~6 a0 w. i* s( n* R. [
http://www.ihcworld.com/_protocols/washing_buffers/pbs.htm

oucflora

: s  l9 ~! P5 S. c

oucflora 发表于 2011-7-28 11:42 8 E2 |7 [1 `% q! E+ M
细胞的免疫荧光染色，我都用PBS，因为细胞培养用品都是用超纯水配制，所以做细胞的免疫荧光染色时用的PBS我 ...

& k: I8 ~- @8 v" |

( z0 {8 I3 t( U2 }: f. j9 c其实关于PBS的配方问题我以前查阅过很多资料，不过在刘爱平主编的《细胞生物学荧光技术原理和技术》（中科大出版社出版）这本书中介绍说PB（phosphate buffer）为磷酸缓冲溶液，只有Na2HPO4和NaH2PO4两种成分。而PBS（phosphate buffered saline）称为磷酸缓冲生理盐水，是在PB的基础上添加了NaCl等成分。$ o2 ^0 n. e: [4 Z2 h4 [1 H1 ~1 Y
在PB和PBS的选择上，个人认为对于活细胞的漂洗工作最好用PBS，细胞被固定后就没有太多的要求了。
4 M4 I9 J- u( S6 D# e- O5 b上面我列举的PBS的配方来源于薛庆善的《体外培养原理与技术》这本书。咱们论坛有电子版，下载地址：http://www.stemcell8.cn/thread-36261-1-1.html

menghy

oucflora 发表于 2011-7-28 11:42
. P; y# }) ?6 H  X细胞的免疫荧光染色，我都用PBS，因为细胞培养用品都是用超纯水配制，所以做细胞的免疫荧光染色时用的PBS我 ...

4 Q. g% x! K! W+ f: f我们PBS的配方和这位坛友的是一样的！后面有事情就没有来得及回，不好意思！

ljs

回复 linlicau 的帖子! F4 e" |; ?, k: u9 l1 v3 \/ X
* Z3 a( w' q5 W' b
PBST中的T是什么意思？

linlicau

ljs 发表于 2011-7-28 16:58
' q* y+ Y; }6 \回复 linlicau 的帖子% U, ^. p4 e) d8 t& ^1 d  x- T

" e, E4 k! w. c6 a) A6 u+ zPBST中的T是什么意思？

$ c/ U2 {$ I) I+ m4 B* N你在洗的时候不是用PBS或者TBS洗，而是使用加了Tween-20的PBS或者TBS洗。一般一升的PBS/TBS加1ml Tween-20。充分摇匀后使用。