免疫荧光染色用PBS和TBS有无区别

深海鱼

做细胞的免疫荧光染色，有用PBS有用TBS的，二者都是缓冲液，不知有啥区别，哪个更好一点？另外PBS必须是细胞培养的PBS吗？自己配制可不可以，会影响结果吗？请各位大侠不吝赐教，感激不尽

menghy

我个人认为PBS还是要好一些，因为TBS里面含有HCL对实验肯能会有一些影响。做免疫荧光的话一般自己实验室配制的PBS就可以，细胞培养级别就是纯度更高一些，你用分析纯的试剂配制PBS完全可以满足实验的需要了！

深海鱼

回复 menghy 的帖子% ~' ^$ C, t$ J2 Y( [: C4 b0 o# y- L
: Y% Y( M. X9 H5 @
谢谢大侠指教, Y2 V5 R7 R4 \% x" O% V
不过网上PBS的配制方法有很多，难以取舍，大侠能否告知您的配方？

oucflora

细胞的免疫荧光染色，我都用PBS，因为细胞培养用品都是用超纯水配制，所以做细胞的免疫荧光染色时用的PBS我也是用的超纯水，给你一个配方：
2 h9 q% v7 ]7 c# L# @$ X7 gKCl                          0.2g/L
5 c# d+ J/ s: G7 \1 IKH2PO4                  0.2g/L9 |7 g$ R# y7 ]5 t  Z! z7 t( ~
NaCl                        8.0g/L) Z4 J4 H! Z1 X
Na2HPO4.7H2O      2.16g/L
( ~% @5 {4 B5 ^" H9 ^5 l9 c* b$ K用超纯水定容到1L 即可；最好是现用现配，4摄氏度保存。- L: \" Q/ v* ^
5 ^* x. S; K, K; a, Q
  

oucflora

以上配方中所列的试剂用国产的分析纯即可。如果没有超纯水，也可以用三蒸水代替。

linlicau

没什么区别。
$ x% D! d5 y4 }3 W
  x: |" ^3 [4 k/ k% x6 WPBST和TBST的区别一般在做磷酸化实验的过程中要用TBST，因为PBST有磷酸，会影响结果。+ i) J: G1 H- g

3 @0 r3 E2 Y8 d; P# ?Immunostaining用什么都无所谓。7 v' a( Y) \7 G) S

* Z& }- n* U3 k4 d  EPBS配方：. M# {, r8 F# ~% K+ q; X4 o5 X" H0 t
http://www.ihcworld.com/_protocols/washing_buffers/pbs.htm

oucflora

' S. u6 P3 c$ q* ]& |# [

oucflora 发表于 2011-7-28 11:42
- p+ ]1 A. m( b* P: r- {6 O0 p细胞的免疫荧光染色，我都用PBS，因为细胞培养用品都是用超纯水配制，所以做细胞的免疫荧光染色时用的PBS我 ...

- M3 X0 k4 f& s( }6 v. }5 \  m: j2 |% c  g  ~+ _
其实关于PBS的配方问题我以前查阅过很多资料，不过在刘爱平主编的《细胞生物学荧光技术原理和技术》（中科大出版社出版）这本书中介绍说PB（phosphate buffer）为磷酸缓冲溶液，只有Na2HPO4和NaH2PO4两种成分。而PBS（phosphate buffered saline）称为磷酸缓冲生理盐水，是在PB的基础上添加了NaCl等成分。4 C7 E4 a& z2 Q& p
在PB和PBS的选择上，个人认为对于活细胞的漂洗工作最好用PBS，细胞被固定后就没有太多的要求了。
1 Q% h3 ^$ Q; p* |% [! W上面我列举的PBS的配方来源于薛庆善的《体外培养原理与技术》这本书。咱们论坛有电子版，下载地址：http://www.stemcell8.cn/thread-36261-1-1.html

menghy

oucflora 发表于 2011-7-28 11:42
2 f; e3 G* y* e1 h8 J细胞的免疫荧光染色，我都用PBS，因为细胞培养用品都是用超纯水配制，所以做细胞的免疫荧光染色时用的PBS我 ...

* Z% w  O' m3 y' s
我们PBS的配方和这位坛友的是一样的！后面有事情就没有来得及回，不好意思！

ljs

回复 linlicau 的帖子0 I7 v& q" F6 m8 o! Y1 Q4 S0 J' r
& p( G6 R! z! L& e6 j
PBST中的T是什么意思？

linlicau

ljs 发表于 2011-7-28 16:58
# a8 Q! p+ v2 r4 U4 \5 A, }- Q回复 linlicau 的帖子
) W& R1 p- ?$ ~) l2 Z' R# v- u
  V0 E) ~+ C: x6 W0 }* k& P4 KPBST中的T是什么意思？

* {1 p0 W0 H, j2 b/ t- l3 R
你在洗的时候不是用PBS或者TBS洗，而是使用加了Tween-20的PBS或者TBS洗。一般一升的PBS/TBS加1ml Tween-20。充分摇匀后使用。