免疫荧光染色用PBS和TBS有无区别

深海鱼

做细胞的免疫荧光染色，有用PBS有用TBS的，二者都是缓冲液，不知有啥区别，哪个更好一点？另外PBS必须是细胞培养的PBS吗？自己配制可不可以，会影响结果吗？请各位大侠不吝赐教，感激不尽

menghy

我个人认为PBS还是要好一些，因为TBS里面含有HCL对实验肯能会有一些影响。做免疫荧光的话一般自己实验室配制的PBS就可以，细胞培养级别就是纯度更高一些，你用分析纯的试剂配制PBS完全可以满足实验的需要了！

深海鱼

回复 menghy 的帖子
8 w: {; `! p7 J: |' ?- _3 ~) F
2 p( J/ j  T  t# y! H谢谢大侠指教3 T) {. ^8 I) M% e7 F* |2 f1 K$ V
不过网上PBS的配制方法有很多，难以取舍，大侠能否告知您的配方？

oucflora

细胞的免疫荧光染色，我都用PBS，因为细胞培养用品都是用超纯水配制，所以做细胞的免疫荧光染色时用的PBS我也是用的超纯水，给你一个配方：
2 P8 O7 V4 @/ S9 bKCl                          0.2g/L- I' v" n' G' o! v% |. ]$ j& [
KH2PO4                  0.2g/L
0 n4 G4 T- F0 b/ @, {# Y8 oNaCl                        8.0g/L% z9 E# x9 j" w+ v
Na2HPO4.7H2O      2.16g/L" L# r& I2 k6 P8 J( H: C- [/ q
用超纯水定容到1L 即可；最好是现用现配，4摄氏度保存。
" v( g5 `# F# Y8 o: q6 L
# \/ l6 C/ E$ x- x# p  D# B  

oucflora

以上配方中所列的试剂用国产的分析纯即可。如果没有超纯水，也可以用三蒸水代替。

linlicau

没什么区别。
7 r3 V6 E1 ]3 |) W! D7 _- k0 n: b; W( v: T& Y6 p; Q7 A0 g* Y
PBST和TBST的区别一般在做磷酸化实验的过程中要用TBST，因为PBST有磷酸，会影响结果。% h# R1 ]+ n' l+ d+ g
- s2 R2 F4 L3 [. c
Immunostaining用什么都无所谓。
/ F. q- V; u* B( Z& b3 ^
% P, [3 K4 A6 t. O! o+ e1 T6 u) O; uPBS配方：
+ S0 c9 O& {8 H, R2 h' Zhttp://www.ihcworld.com/_protocols/washing_buffers/pbs.htm

oucflora

2 h9 P% J3 n. d- J

oucflora 发表于 2011-7-28 11:42 ! G/ |6 J* M$ g9 n8 e1 m
细胞的免疫荧光染色，我都用PBS，因为细胞培养用品都是用超纯水配制，所以做细胞的免疫荧光染色时用的PBS我 ...

4 V" x1 I- }' |, p. C
; H/ L" y  ^3 I( }
其实关于PBS的配方问题我以前查阅过很多资料，不过在刘爱平主编的《细胞生物学荧光技术原理和技术》（中科大出版社出版）这本书中介绍说PB（phosphate buffer）为磷酸缓冲溶液，只有Na2HPO4和NaH2PO4两种成分。而PBS（phosphate buffered saline）称为磷酸缓冲生理盐水，是在PB的基础上添加了NaCl等成分。9 K: ?" b7 W5 h9 f, p& v
在PB和PBS的选择上，个人认为对于活细胞的漂洗工作最好用PBS，细胞被固定后就没有太多的要求了。
3 B3 D1 [& r+ V# D上面我列举的PBS的配方来源于薛庆善的《体外培养原理与技术》这本书。咱们论坛有电子版，下载地址：http://www.stemcell8.cn/thread-36261-1-1.html

menghy

oucflora 发表于 2011-7-28 11:42 ( x* n6 m4 f. [4 C
细胞的免疫荧光染色，我都用PBS，因为细胞培养用品都是用超纯水配制，所以做细胞的免疫荧光染色时用的PBS我 ...

* F. N* X  j- j" ~我们PBS的配方和这位坛友的是一样的！后面有事情就没有来得及回，不好意思！

ljs

回复 linlicau 的帖子( J8 _' {3 @+ m0 }9 B: H' [

( b! D% x9 I8 x% y- UPBST中的T是什么意思？

linlicau

ljs 发表于 2011-7-28 16:58
$ n  B$ o) h1 }' S) y/ E回复 linlicau 的帖子8 H; r( I% x% k$ a) W. u9 s' S

4 v2 b( i' t% A# a. cPBST中的T是什么意思？

$ j. H' c7 {; R9 j你在洗的时候不是用PBS或者TBS洗，而是使用加了Tween-20的PBS或者TBS洗。一般一升的PBS/TBS加1ml Tween-20。充分摇匀后使用。