免疫荧光染色用PBS和TBS有无区别

深海鱼

做细胞的免疫荧光染色，有用PBS有用TBS的，二者都是缓冲液，不知有啥区别，哪个更好一点？另外PBS必须是细胞培养的PBS吗？自己配制可不可以，会影响结果吗？请各位大侠不吝赐教，感激不尽

menghy

我个人认为PBS还是要好一些，因为TBS里面含有HCL对实验肯能会有一些影响。做免疫荧光的话一般自己实验室配制的PBS就可以，细胞培养级别就是纯度更高一些，你用分析纯的试剂配制PBS完全可以满足实验的需要了！

深海鱼

回复 menghy 的帖子
( [) C9 i1 s: o# s( q( k% y
. T' a) U: F! E5 S谢谢大侠指教
+ |0 s. B7 d4 W! Z* r# G不过网上PBS的配制方法有很多，难以取舍，大侠能否告知您的配方？

oucflora

细胞的免疫荧光染色，我都用PBS，因为细胞培养用品都是用超纯水配制，所以做细胞的免疫荧光染色时用的PBS我也是用的超纯水，给你一个配方：# @# M1 R# W$ v4 Q2 U* F1 j
KCl                          0.2g/L7 r9 W- o8 f7 k0 e
KH2PO4                  0.2g/L9 ?$ e' e5 Z7 t6 o
NaCl                        8.0g/L% B1 d- J' e( @3 x" {
Na2HPO4.7H2O      2.16g/L) m$ L" g9 T, c0 f
用超纯水定容到1L 即可；最好是现用现配，4摄氏度保存。
) {8 K5 b) O+ h4 x" G# R
2 H4 l2 Q* B! ?) W4 o  

oucflora

以上配方中所列的试剂用国产的分析纯即可。如果没有超纯水，也可以用三蒸水代替。

linlicau

没什么区别。
  I& W& \  r9 z0 n* M
+ d2 j1 Q" q3 p7 F' jPBST和TBST的区别一般在做磷酸化实验的过程中要用TBST，因为PBST有磷酸，会影响结果。$ ]$ A0 B/ s2 q& ~0 S" B

) ^2 h! Z- r* C& j$ _: a# vImmunostaining用什么都无所谓。
2 D) G3 ]; @! ~, h; r/ d3 C0 G& u9 d6 m+ k$ \3 X. Z) J) \" r0 E$ b) ~. O
PBS配方：
9 f' U8 U/ x$ ~9 ihttp://www.ihcworld.com/_protocols/washing_buffers/pbs.htm

oucflora

6 L' k; S/ x* f9 x! l, I

oucflora 发表于 2011-7-28 11:42 ; f# M% [; \: \; V! s
细胞的免疫荧光染色，我都用PBS，因为细胞培养用品都是用超纯水配制，所以做细胞的免疫荧光染色时用的PBS我 ...

: N- F. T# M; R* t
7 @1 ~; ]  }9 p7 e, w
其实关于PBS的配方问题我以前查阅过很多资料，不过在刘爱平主编的《细胞生物学荧光技术原理和技术》（中科大出版社出版）这本书中介绍说PB（phosphate buffer）为磷酸缓冲溶液，只有Na2HPO4和NaH2PO4两种成分。而PBS（phosphate buffered saline）称为磷酸缓冲生理盐水，是在PB的基础上添加了NaCl等成分。8 I! o3 _1 J4 [; P
在PB和PBS的选择上，个人认为对于活细胞的漂洗工作最好用PBS，细胞被固定后就没有太多的要求了。
& t5 Y, u& B: ?  N9 ]上面我列举的PBS的配方来源于薛庆善的《体外培养原理与技术》这本书。咱们论坛有电子版，下载地址：http://www.stemcell8.cn/thread-36261-1-1.html

menghy

oucflora 发表于 2011-7-28 11:42
* y' E; ?; a  J% B' q$ n6 d细胞的免疫荧光染色，我都用PBS，因为细胞培养用品都是用超纯水配制，所以做细胞的免疫荧光染色时用的PBS我 ...

" L3 ?8 q( g3 O* {2 Y7 X% N# {
我们PBS的配方和这位坛友的是一样的！后面有事情就没有来得及回，不好意思！

ljs

回复 linlicau 的帖子1 c: |9 y: r0 F' ~
; {' N8 C# R- r$ G6 }
PBST中的T是什么意思？

linlicau

ljs 发表于 2011-7-28 16:58
+ `9 g/ C$ P3 r* R4 `! r: W回复 linlicau 的帖子
6 ^3 x, }! d6 o6 N) b* ]( o1 m8 Y( v2 g( C% D5 Z
PBST中的T是什么意思？

. ~* A% R' m, S! I
你在洗的时候不是用PBS或者TBS洗，而是使用加了Tween-20的PBS或者TBS洗。一般一升的PBS/TBS加1ml Tween-20。充分摇匀后使用。