体外受精培养液的pH各是多少！

huozhicb

给位大虾，小弟摸索了好长时间的IVF但是效果一直不好，换了很多培养系统（HTF/KSOM-AA、mKSOM/KSOM、T6/CZB）都不稳定，找了一些原因，发现各方面的资料里，对于IVF过程中使用的各培养液的pH描述得很少（也许是小弟不才，没有查到一手资料），请各位专家指点。麻烦大家把自己使用过的系统和每一过程使用的培养液的pH晒一下吧，谢谢！' d/ y: Q6 z, D9 M$ j5 H; _
我配好各种培养液之后，将所有培养液都调pH至7.4左右，使用前12h做成小滴，用矿物油覆盖，放入培养箱平衡。

帕帕拉

你做的什么动物？

帕帕拉

你做的什么动物？

jhu132llh

都是7.4的
* k% v# B# _- O+ ~6 F7 C一直也没问题的3 f- l) ]! M; |2 u6 |/ e
不知道你的怎么就效果不好" j3 B  o6 ?# _7 @
考虑过培养箱的培养条件吗

POPOLD

7.2

huozhicb

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- R$ S  R5 U; c' A) j3 O+ r# o% D2 Y8 {6 t$ i8 d
小鼠的谢谢支持

huozhicb

回复 jhu132llh 的帖子4 h5 u2 M- A; H; f) K) ]9 ^' G
7 k+ Q. o4 l2 I0 j2 D
谢谢您支持！我们的培养箱是新买的，买的时候校准过：37℃、5%五九高纯二氧化碳、饱和湿度。7 j/ o# j3 C! M- \! D% M5 Y
我想问一下，你们的pH时按照《小鼠胚胎操作手册》上的方法，先充气平衡然后测pH吗？
9 b8 ^* J1 ]- h1 Q+ f5 X我们这里没有充气的装置，所以直接用pH计调的pH。感觉靠酚红的颜色标定有迷惑性：加了BSA之后培养液的颜色都偏黄。0 j: ~- W8 S+ e9 n; B% k

jhu132llh

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1 d+ y  U% O! f0 r( T! j2 H& g2 |0 b
* u8 D" H* L7 X& q2 s' g先充气平衡然后测pH是要更加准确
. U0 V* G0 b( D5 q但是一般情况下我们也不这样做
# G) D* n! |$ h! g* N$ y1 s0 d4 j太麻烦了1 X& K2 z3 a% [  c3 C" T. s
都是直接用pH计调的pH, `' `! Z: ^4 W
是的
4 W, W& {9 l- v9 M/ b7 [加了BSA之后培养液的颜色是偏黄的: r  O0 h. }& h( z
但是只要PH值对了就OK了，一般在PH校准后在培养箱中CO2对PH的影响不大的
6 c* D5 I9 n. H; D2 `% f$ G; W不影响细胞的正常生长的
; L6 Q) N% R) A; ^9 `只是颜色是确实有点欺骗性
! ?5 _4 @1 W% K) z需要及时换液

huozhicb

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9 i" d' b/ O& G7 [6 r
# I; y/ T( S  G* k' {谢谢版主我之前摸索的时候为了以防万一（因为以前实验室做这个一直效果不好），花血本买了进口的HTF和KSOM-AA（有点二，但出于无奈，实验很紧），这两天试了试，结果也不好！
- _" T0 V9 i# V5 r' ^3 \: J0 u6 I, m' O; J' N) o
之前您说培养箱可能有影响，二氧化碳装机后已经请公司的人测过了。我又重新测了一下培养箱的温度，培养箱的最上面一层和最底下一层之间相差0.5℃左右，最高温度（长期放置的温度计的读数）能到37.5摄氏度。这个有影响吗？
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" Y  d5 y2 H& o4 t4 d; H我仔细观察过受精时间结束后的情况，有不少精子围绕卵母细胞，但是能受精的却很少，是获能不好吗？我每次都是将精子稀释后，获能1小时，受精5-6小时，需要再延长吗？* W; w& g: N, f! X( _- `4 ^
- X: Q9 O% a* z: X8 R$ O3 C  T
麻烦版主大哥了，谢谢！

huozhicb

回复 jhu132llh 的帖子0 q/ ]  F' O1 e( v* _

( ^7 I" N7 K- T7 ^" e* O! A谢谢版主我之前摸索的时候为了以防万一（因为以前实验室做这个一直效果不好），花血本买了进口的HTF和KSOM-AA（有点二，但出于无奈，实验很紧），这两天试了试，结果也不好！! @7 L) U+ H/ {, }$ ]2 O3 ]" u6 B

: @: U# ^) J1 L# E. F之前您说培养箱可能有影响，二氧化碳装机后已经请公司的人测过了。我又重新测了一下培养箱的温度，培养箱的最上面一层和最底下一层之间相差0.5℃左右，最高温度（长期放置的温度计的读数）能到37.5摄氏度。这个有影响吗？
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8 y2 S6 ?& y7 \/ m, G6 g  {- M我仔细观察过受精时间结束后的情况，有不少精子围绕卵母细胞，但是能受精的却很少，是获能不好吗？我每次都是将精子稀释后，获能1小时，受精5-6小时，需要再延长吗？- u# V* P' B, b1 z' \
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麻烦版主大哥了，谢谢！