MSC 冻存问题

andylee824

近来，MSC复苏后显微镜下活率能达到70%，可是贴壁率很低，是什么原因呢？冻存液用的是10%的dmso和90%的FBS;冻存时，细胞融合度大约在90%到99%之间，是不是融合度太高了，细胞老化的量已经多了。请高手指教，谢谢

lazyworm

5%DMSO就行了，用配制好的培养基配制冻存液，只用FBS还是有点浪费哈。复苏时水浴锅温度40度比37度要好。

deshenglll

70%比较低了，再加上不贴壁的细胞，那就更少了。看看是不是操作的问题。我们一般39度水浴复苏两分钟，用4度生理盐水洗去DMSO，洗两次。
6 ^  p$ q' y! R* `/ V5 z8 h  y: d冻存前细胞不要长的太过。90-95%都还行吧。冻存密度：106-2*107/管。祝你好运。

na6021023

回复 hwlightning 的帖子" Q( V9 o& L9 l  e' d) \
7 |# T. J+ M$ n0 S: V6 @1 }
原来大家都是42度水浴。我们实验室一直用37度水浴，而且怕污染还给冻存管外套一个PE手套的指头。每次都眼看着2分钟过去了，还是有冰晶。学习了。

漂流萍

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  c, o, C$ t7 z1 p& D9 N
  ]! w2 ~  Y1 O+ z" L! G4 ^& p请问，为什么复苏的时候样本不能完全解冻呢？

湖南干细胞

回复 hwlightning 的帖子
" u5 n: A; G+ B4 w
2 N  }5 o  W/ x9 V谢谢。

hwlightning

回复 湖南干细胞 的帖子" X; Z" _' S$ Y$ z& M

, q4 j& A$ I, o8 ]% w+ h我复苏细胞一直用的是42℃，复苏的细胞情况都非常好。: A8 U, l3 Y& s( Q1 C1 B

湖南干细胞

回复 hwlightning 的帖子2 c0 F. z+ W  Y, K: n. {) t" I

8 L) Y7 z6 r1 \" Q; C+ K' N细胞复苏时，我们都是37℃水浴，42℃会不会太高了

tkpss18

回复 deshenglll 的帖子  F: ?- z; G0 B6 @1 t
- m( l, B# V0 ~: ^/ O, W
我想复苏的时间主要是根据样本复苏的体积和容器来确定。最主要是不要把样本完全解冻。

tkpss18

回复 yuwenlan 的帖子) k0 I6 B$ v+ o9 _* v+ I

( b6 }: [& H5 {我想请问一下大家在复苏的时候，如果是用离心的方法去DMSO的话，在离心完后有没有出现像Jelly like substance的东西，这个有人说是因为复苏的时候DNA会从死掉的细胞释放出来，然后会把附近的细胞团在一块。其实这个情况也不是每一次也会发生，但是一旦发生了就会有很多细胞流失。是不是唯一的解决方法就是加DNAse?