求教：成纤维细胞原代状态不好的原因

牙牙丫丫123

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+ F7 z( w# g% a  D& r; }我养的是猪的胎儿成纤维洗吧，原代培养方法是0.25%胰酶消化，终止离心后接种，10%FBS的培养液，原来用这种方法培养细胞生长很好，可是这次培养时，第二天细胞长出来就特别老，而且细胞全是小黑点，请问这是什么原因造成的……是血清或者培养液PH值的问题吗？) i5 O5 Q0 j, ~; Z4 Q

wangshumin12311

这细胞救不回来了，，，重新来过，，，看有没有支原体或者细胞受啥罪了，，，血清正常的话不会出现这情况，，，，话说你是哪个单位，，，做猪的？

牙牙丫丫123

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5 N/ k& {- P+ [. o3 J. q您觉得这更像是支原体污染？我是东北农业大学的，我们实验的主攻方向是猪

军医

是不是抗生素加多了？

星移龙一

我们实验猪的用的都是15%~20%的FBS，原代都很好啊，传代生长也很好，不知是不是这个问题。

牙牙丫丫123

回复 军医 的帖子# X- F/ f5 N- ^7 N) w& S
, E8 v# K0 {5 N) H+ c, M
我加的正常抗生素用量

牙牙丫丫123

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能请问一下您是怎么做原代细胞培养吗？$ [1 D' i' a2 M( E

牙牙丫丫123

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* Q# ~9 _0 v  x2 v; U
1 g" ^( s0 {* a: @还有，我这次使用的是10%的培养液，有没有可能是血清质量本身不好，然后再加上血清浓度低，导致细胞营养不良呀……然后细胞就长成这样了
& v& i( p. d, ]6 i# Z- v

军医

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/ D$ J- f  t# X' |+ j我们用10%的血清养原代也挺好的，是不是时间长了，迁出的细胞长的太密了，生长抑制了

星移龙一

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胎儿的取部分组织，剪碎后涂板培养，6 U3 G" n) P+ Y4 Q: A; S
成体的一般是耳源的，将毛刮去后，剪碎涂板。