逆转录病毒在293T细胞中包装，一般多少时间收病毒啊？

刘森泉

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$ z7 r# Z% a7 U8 `7 x- l* j逆转录病毒在293T细胞中包装，一般多少时间收病毒啊？已经两天了，293T细胞看起来状态已经不行了，可是我的备转染细胞还没长好啊！能不能放到第三天再收病毒转染啊，还是需要今天收病毒，冻存起来？冻存对病毒滴度影响很大吗？谢谢！

shylook

状态都会不好的% P8 ?: Y" k1 T6 n! H
培养基黄了也不要去理会
6 g6 D1 X* Y( W9 _: ^
8 ~9 U! P. I, s% Y3 c$ `一般转染之后48h收 有时也40h收
+ }0 s  P, m4 R% }( M# _很多protocol24h  48h分别收一次
- k; \' d3 B' X5 f5 j: W  b6 z
5 d( i' R0 }/ y9 ^9 A1 b7 L个人觉得48h收足够
' ~; w% o4 l+ l5 @8 E5 p3 P1 D
+ l( i& S5 D2 I+ B% c+ X你可以冻起来（分装）也可以放4度几天再测滴度
, [6 M' U* Q5 _. a本人是分装-80

lemma710

48h 72h收病毒，分开放，等测了滴度在决定要不要混起来。* y7 c" D, @8 ?( Z+ Z& Q8 F( t! A8 C" P
病毒你可以先收了，放在4度，一两天是没有问题的，以后放最好分装放在-80。
( o( N$ o; G9 k7 |-80是会降低一些病毒活性的，但长时间放4度降低的更多的~

刘森泉

谢谢各位哈。

yangpan521

我们这一师兄将病毒液放入了 -80度，被老师骂了一顿，老师说病毒液不能存放，应现收先用。如果细胞没备好，就把病毒液扔了 。请求说法

tianlanghehb

72h收是没有问题的，保存一般都是放-80度。

shylook

yangpan521 发表于 2011-10-29 10:05
! s; `7 u$ B  Z/ c+ B我们这一师兄将病毒液放入了 -80度，被老师骂了一顿，老师说病毒液不能存放，应现收先用。如果细胞没备好， ...

0 g( Y6 R4 |0 w" E只能说你老师比较死板+ v2 f( H( F0 U* `8 a# ^0 l" {' l
平时包的话 转染48h收
! I" b8 H9 _& n  y转染后加15ml DMEM0 n7 g& B4 i5 _: h! }( v
收的时候能收14ml
# G: M/ t  s" m# o/ p* @分装1ml/每管) o. t+ G; n& N
-80保存& W( V5 W6 D# s8 P" |
半年以上1 c( k) Q" Y5 M, W/ v" }
感染10cm dish 只用1ml病毒
2 l3 R: k8 [. R9 ~puro筛时 感染效率90%以上

guo6259

很负责的说是48h和72h各一次。但关键是保证293T在转染时是70%融合的。要不72小时就长的太密了。
* B2 O# |" b, f3 q; Z: P1 C8 l293T是关键！！$ X) E% Q+ w/ v& L
至于收 的病毒-4度放一个星期也没什么问题。

王乾

病毒液一般转染完8-12小时换液，一般12小时就已经有病毒产生了，收病毒的时间一般是换完液36-48小时，也有人推荐36小时收一次，72小时再收一次混在一起用。另外病毒是可以冻存的，一般是液氮速冻，溶的时候好像速溶和慢溶都行，我测过冻前和冻后的滴度区别，一般冻融一次滴度会降低为原来的一半。病毒感染一般的细胞滴度一般不是问题，但感染ES滴度就不要太低，怎么也得10的6次方吧。

rexhz

你们的慢病毒都是用原液做吗？有做慢病毒浓缩的没有?