逆转录病毒在293T细胞中包装，一般多少时间收病毒啊？

刘森泉

+ C2 G. L$ y" N" w

1 o' o0 X7 Z4 D, E逆转录病毒在293T细胞中包装，一般多少时间收病毒啊？已经两天了，293T细胞看起来状态已经不行了，可是我的备转染细胞还没长好啊！能不能放到第三天再收病毒转染啊，还是需要今天收病毒，冻存起来？冻存对病毒滴度影响很大吗？谢谢！

shylook

状态都会不好的
- R5 Q0 {# l; y# G  f2 t" S培养基黄了也不要去理会
3 z6 ]" y2 ?6 X0 |/ L7 I: p7 N
0 T- [( p/ `5 q3 @一般转染之后48h收 有时也40h收7 \/ s. n. c6 h1 S
很多protocol24h  48h分别收一次
: o. u- m8 h. {/ A* t, v" e2 Y6 A0 p+ E/ X
个人觉得48h收足够0 v, q. f4 b! S. {6 Z. X/ P% S8 _6 Q
. A+ U4 ~5 k. X& Z  f/ a1 {0 L/ d0 r
你可以冻起来（分装）也可以放4度几天再测滴度% Z% |0 G/ k' \5 w
本人是分装-80

lemma710

48h 72h收病毒，分开放，等测了滴度在决定要不要混起来。/ r9 n% o- h1 N! S8 r% k9 K
病毒你可以先收了，放在4度，一两天是没有问题的，以后放最好分装放在-80。$ B! X! ?6 B7 Q* d
-80是会降低一些病毒活性的，但长时间放4度降低的更多的~

刘森泉

谢谢各位哈。

yangpan521

我们这一师兄将病毒液放入了 -80度，被老师骂了一顿，老师说病毒液不能存放，应现收先用。如果细胞没备好，就把病毒液扔了 。请求说法

tianlanghehb

72h收是没有问题的，保存一般都是放-80度。

shylook

yangpan521 发表于 2011-10-29 10:05
% |, z/ b- C# d6 K  L我们这一师兄将病毒液放入了 -80度，被老师骂了一顿，老师说病毒液不能存放，应现收先用。如果细胞没备好， ...

4 m* T2 Z, s, B4 o只能说你老师比较死板- A  d+ a1 B4 r/ c
平时包的话 转染48h收
3 e5 {) r; s' D$ f+ M4 [5 U* ]转染后加15ml DMEM
( i9 X- z1 A7 e; t4 h. p收的时候能收14ml
' I5 X3 p7 b$ C" e分装1ml/每管
/ G; R: _! D$ |9 L-80保存
: |- E  h- J( J* L4 G$ |半年以上% T2 a9 x5 N2 o+ b1 a: S7 `1 G- r
感染10cm dish 只用1ml病毒 : b4 b6 T& ~2 R6 U, a
puro筛时 感染效率90%以上

guo6259

很负责的说是48h和72h各一次。但关键是保证293T在转染时是70%融合的。要不72小时就长的太密了。  P, R# j& w, v. `: x; f
293T是关键！！
/ B7 T) G) a& ~: K4 h2 \至于收 的病毒-4度放一个星期也没什么问题。

王乾

病毒液一般转染完8-12小时换液，一般12小时就已经有病毒产生了，收病毒的时间一般是换完液36-48小时，也有人推荐36小时收一次，72小时再收一次混在一起用。另外病毒是可以冻存的，一般是液氮速冻，溶的时候好像速溶和慢溶都行，我测过冻前和冻后的滴度区别，一般冻融一次滴度会降低为原来的一半。病毒感染一般的细胞滴度一般不是问题，但感染ES滴度就不要太低，怎么也得10的6次方吧。

rexhz

你们的慢病毒都是用原液做吗？有做慢病毒浓缩的没有?