逆转录病毒在293T细胞中包装，一般多少时间收病毒啊？

刘森泉

7 w. d1 b3 A% s  y, d, h
1 ~& v4 A2 E4 p) h& N2 n逆转录病毒在293T细胞中包装，一般多少时间收病毒啊？已经两天了，293T细胞看起来状态已经不行了，可是我的备转染细胞还没长好啊！能不能放到第三天再收病毒转染啊，还是需要今天收病毒，冻存起来？冻存对病毒滴度影响很大吗？谢谢！

shylook

状态都会不好的
  e/ j$ [& s0 p+ {# ^* p培养基黄了也不要去理会* G% V7 [0 C% `5 Z- [$ J

* \' l: T& |9 {9 g: d一般转染之后48h收 有时也40h收" @5 h5 C0 g' ], }# Q: v
很多protocol24h  48h分别收一次
+ n" C9 A/ n: y9 z4 N) s4 f. Q1 J# h5 X( z! l( r" h
个人觉得48h收足够* j% Z$ ]7 Z" z+ C* Q

2 F2 h- ?; A/ d: ], P你可以冻起来（分装）也可以放4度几天再测滴度7 j, d6 k6 K, L5 f' L7 d( g1 {
本人是分装-80

lemma710

48h 72h收病毒，分开放，等测了滴度在决定要不要混起来。
" l: h& g, R9 J1 _9 A病毒你可以先收了，放在4度，一两天是没有问题的，以后放最好分装放在-80。$ R+ w; Q% p- D7 y
-80是会降低一些病毒活性的，但长时间放4度降低的更多的~

刘森泉

谢谢各位哈。

yangpan521

我们这一师兄将病毒液放入了 -80度，被老师骂了一顿，老师说病毒液不能存放，应现收先用。如果细胞没备好，就把病毒液扔了 。请求说法

tianlanghehb

72h收是没有问题的，保存一般都是放-80度。

shylook

yangpan521 发表于 2011-10-29 10:05
  P( O4 I9 C3 G我们这一师兄将病毒液放入了 -80度，被老师骂了一顿，老师说病毒液不能存放，应现收先用。如果细胞没备好， ...

9 v/ D# x* q* d3 D" n. U9 J$ p2 Q
只能说你老师比较死板: M. S; g* g3 d
平时包的话 转染48h收
6 B! g7 U8 \" m转染后加15ml DMEM
! I1 v, `9 J$ U( _收的时候能收14ml
4 B" P; w) v- n4 N分装1ml/每管2 ^% n( p2 W6 T. W# Y
-80保存
4 q/ q/ d$ P1 _5 J: ?& k" Q6 Z4 B半年以上8 P9 I* _8 i. c8 ^$ |
感染10cm dish 只用1ml病毒
& }" t8 m, c+ `5 @' o& Cpuro筛时 感染效率90%以上

guo6259

很负责的说是48h和72h各一次。但关键是保证293T在转染时是70%融合的。要不72小时就长的太密了。
1 z# @4 x' i7 Y. T2 ]5 B293T是关键！！
- o, K' s( }$ Z/ M1 [& Z" x1 }至于收 的病毒-4度放一个星期也没什么问题。

王乾

病毒液一般转染完8-12小时换液，一般12小时就已经有病毒产生了，收病毒的时间一般是换完液36-48小时，也有人推荐36小时收一次，72小时再收一次混在一起用。另外病毒是可以冻存的，一般是液氮速冻，溶的时候好像速溶和慢溶都行，我测过冻前和冻后的滴度区别，一般冻融一次滴度会降低为原来的一半。病毒感染一般的细胞滴度一般不是问题，但感染ES滴度就不要太低，怎么也得10的6次方吧。

rexhz

你们的慢病毒都是用原液做吗？有做慢病毒浓缩的没有?