关于PEG8000的配制问题

huangcong1988

不知道40%的PEG8000怎么配制，有的说是直接用去离子水配，也有说用去离子水配后加氯化镁，到底是怎么配制呢？而且PEG8000是用来浓缩核酸的么？

john7812x

聚乙二醇(PEG)在不同的盐溶液中可以结合形成孔径不同的网状结构,重组质粒是超螺旋的双链闭合环状DNA,它们与RNA 、线状DNA等其他杂质分子在PEG中的沉降系数不同。通过高速离心，使沉降系数较高的重组质粒DNA沉淀下来，而其他杂质分子和不同构象的质粒DNA分子被网状结构阻隔，从而纯化质粒。% q4 s) N0 f5 `

huangcong1988

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3 Z3 ]+ U) e( F; L
5 c4 }" M. d1 F3 U; Y哦，纯化RNA也行是吧？那40%的PEG8000该怎么配呢？

zhusealin

浓缩核酸的不太清楚。我们是用的50%PEG 1500做细胞融合用的，配的时候就用PBS溶解，高压灭菌

huangcong1988

回复 zhusealin 的帖子% Y. K8 p4 a5 o
8 v% b: V+ a% m% }9 A! a
是，PEG也用于细胞融合

john7812x

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  Y$ @0 e/ F1 G/ n) m7 _) K) Z' G/ Y) H* ]' F5 @
PEG8000可以纯化RNA，如网页中所述：http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/16186.html# \& }3 Z7 d5 c
但是，我没有用过PEG8000提取RNA，我用试剂盒提取小量RNA，或用Trizol提取大量RNA。
& K. N9 v# G& ^! ?7 {5 @' D2 P, V7 }5 ]
40%（w/v）PEG8000 用去离子水配，如文件中黄色部分所示：! n- s6 ^% u; w- u( Q
, }/ n" v) @. Y+ Q3 x# `

; u$ X, |& E( Y5 L假如你打算用PEG8000 提取RNA，建议用DEFC处理过的去离子水来配制。

huangcong1988

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- S: I8 {* O. y8 l0 L" L% B9 K, t! R  f8 }; u0 d
不是提RNA，是浓缩，就是已经收集的慢病毒上清，想用PEG8000纯化一下，谢谢

huangcong1988

回复 john7812x 的帖子0 u. H! {) N3 L* P
+ Z6 Y1 T0 P" ]$ q, y
有道理，慢病毒上清要纯化的话呢？慢病毒是RNA+外壳（蛋白），那去离子水是应该用DEPC水处理一下

john7812x

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# Z% N% l; v" Q
! Q1 ]* t3 ]9 @  n, j2 x! y你是不是打算浓缩Lentivirus，来提高它的滴度, 为下步感染实验做准备?1 m6 w! E$ c& o5 z
还是要浓缩Lentivirus 的RNA？$ a3 G+ k" c, y6 v9 C; O  R

* t5 p0 S6 l7 R7 ?6 i; A2 }若是为了提高病毒滴度可以超速离心的方法：' e( H( ]1 ]2 H
# V  f. n0 B$ C' ^* T& u8 q% ?
若是为了浓缩RNA，可以冷冻干燥，或沉淀RNA后再溶解，等等。
, V$ p2 ~: V$ X7 k  u0 P, G% u8 z6 b1 q6 h: }# P
补充内容 (2011-11-1 19:54):& w+ g. Q8 {7 l, p; i6 D: G
在这个超速离心的protocol 里用的是sucrose, 没有用PEG，可能和你实验室计划不同。

huangcong1988

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1 x# t( z- _- a* b: W- ]2 |2 t
/ J' j' B% z: g% s* K( p; N非常感谢！我是为了浓缩慢病毒