球长出来了，几个小问题请教，如何分离球？

doundo

做的是原代细胞。球长出来了，除了球外，还有很多悬浮的小细胞，有几个问题求教
8 r; n, D( m, I5 o6 x1 ^3 p1、有什么方法可以只收集细胞球？单纯通过离心 会把细胞球和悬浮的小细胞都离至试管底部。
4 |# [+ s  f+ \2、细胞球传代与冻存时 是否将细胞球和悬浮的肿瘤细胞一起传代？* s( X2 n  e+ }$ c
3、取肿瘤组织做原代用无血清培养（加了bEGF，FGF,B27等 ），我养的肿瘤细胞是悬浮细胞，肿瘤组织中还有其他细胞成分，贴壁的细胞容易去除，悬浮的细胞呢是否会因为缺少血清而“饿死”？如果存在，如何去除这些杂细胞成分。* E4 N% C5 c; W8 n! V
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谢谢！！！！！！

zz091115

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肿瘤细胞可以悬浮培养的 很多血液细胞也能悬浮培养

doundo

回复 zz091115 的帖子: s" ^8 k; m* P8 c' \4 N
' |$ U7 G( K- Y, u
如果非干细胞会在悬浮状态下凋亡，那么传了几代的干细胞，除了球之外的悬浮的单个细胞都是干细胞？
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3 w0 f1 L# U# c8 |4 \: G. O6 N我自己买的细胞株 三株都是悬浮细胞。而我养的原代也是悬浮细胞。; ^1 Q# D+ Y$ w3 f3 T. {+ s

. W) w# G0 A/ @! o, ^3 @

zz091115

回复 doundo 的帖子$ A/ o1 T8 I. I' h6 V' M
  J* Q6 l! d5 Q' I7 Y" _
悬浮培养除了你提到的细胞其它会死的原因是因为正常细胞需要贴壁获得survive的信号 一旦不能贴壁就会激活apoptosis信号 就会死掉 不是因为缺乏血清 实际上你加的B27就是血清替代物 不直接用血清我想是想要避免血清内的一些RNA对细胞信号的干扰吧（个人猜测） 我想知道你的EGF和FGF和B27加的多大浓度 基础media是不是DMEM/F12 此外还添加了别的什么没有 我准备做下 但是发现没有现成的培养基 只能自己配置了

doundo

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2 P. D' K' H( G感谢您的解答。$ i0 j. |8 \; f$ c9 C
我有三株肿瘤系细胞株，加无血清培养，细胞增殖很快。. b% W5 _% p  F
此外，从我样的原代来看，除了细胞球之外，还可以看到许多悬浮的小细胞，这些应该都是肿瘤细胞而非单个的肿瘤干细胞。4 J4 v$ n0 f1 c& Y
- z, J; d2 B- B) x
那么肿瘤细胞到底能否在血清培基中培养？
) x- D, X+ j. o1 E
9 s0 u) `: K  _. e7 D干细胞之所以能生存，应该是生长因子以及B27的成分起作用。这些成分也能非干细胞性质的肿瘤细胞提供生长条件吗？

doundo

有朋友问我qq 我没有权限发送消息，只好贴在此：19586420 欢迎交流

shen_coco

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5 K. A! Z9 w4 p
& @1 y) o- B; u& g干细胞培养基缺乏血清，一般的肿瘤细胞可能在干细胞培养基中难以生存，至于干细胞为什么可以在其中生存，我也没有特别的去研究，只是看到文献中用这种方法可以富集干细胞，我猜可能干细胞细胞周期较慢，需要的营养物质更少吧。

doundo

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9 Q8 f5 g- O6 r( b# V7 s5 _. B/ M
感谢shen-coco , Q, X& H! u) Y$ o6 P
我有两瓶传了代的细胞，感觉比上一瓶干净了很多。确实如你所言。
: `' m4 O+ j! i, D* W4 r* b! K0 S
我想请问下，
8 ?( C* d: p! p% Z7 v: Y4 A为什么肿瘤组织其他非细胞不能再干细胞培基中持续生长？. z* Z8 a7 V% r* Y+ |
我手头有一株肿瘤细胞（悬浮细胞），我试图用干细胞培基培养干细胞，养了很多天，细胞增殖速度非常快。是否说明肿瘤细胞应该是可以在干细胞培基中持续生长？

shen_coco

多培养几代，杂细胞就会越来越少的

meister

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, w/ R, l3 L$ M1 Q5 ~2 T0 J+ p, j; |
, q7 l  q( h0 J4 @# I细胞碎片可以通过离心去除， 但不会很完全。