提过组蛋白的请进

xujie158

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* ^& k2 ?- x6 v1 I- E2 b因为第一次提组蛋白histone，有些问题需要跟大家请教一下。4 A4 x. \8 b7 L8 }
我提完组蛋白，跑了一个SDS-Tris-glycine胶，然后用考马斯亮蓝染色，现在H3、H2B、H2A、H4位置都与其大小相符，唯独H1大小不符，正常约21-22（根据pubmed上公布氨基酸序列计算得到），但从图上看应该在30-32左右，而且是两条带，我又查阅了文献，Nature protocol上的一篇文章显示，其胶图与我的结果一致。
# X$ b+ R- @& k  U我的条带图
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2011-11-25 08:54 上传

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Nature中的条带图
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2011-11-25 08:53 上传

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9 R8 j4 Q' v9 H4 X" D现在是请问谁能给我解释一下原因啊？
3 ~% i/ s! R! F) B我想知道比较确定的回答，如果是回答诸如是不是有修饰啊？是不是有几种不同的type啊？就麻烦大家发个“顶”顶一下就好了，当然如果能够给出具体的原因另当别论。

xujie158

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0 {3 E: h' T2 B1 o0 b9 _回复 mayansen1314 的帖子2 z- ^0 `; ^9 c7 f& X& f: D
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不好意思，我们是公司的，可能不能给你有效的帮助信息，因为我们所用到的western试剂都是进口试剂原装的，所以配方我们不需要管的。我感觉如果一般实验室实验的话，不会用到我们使用的试剂，因为价格都比较高，平均我们做一个板的western成本在200元以上，并不适用于高校实验室使用，如果你当真需要的话我可以把商品货号给你。  |) _' ]; I, U4 N6 C$ Z9 i
我们转膜的话用的是半干转，似乎也不符合你的要求。/ H% P  Z- h" t
你可以网上搜索一下，信息很多的。

mayansen1314

求阁下组蛋白提取及WB protocol，包括组蛋白裂解液配方，pvdf膜孔径，转膜电压电流及转膜时间，方便的话在给来点转膜液配方，不胜感激。

xujie158

谢谢大家讨论

xujie158

回复 eley 的帖子3 K" z5 `3 U4 }

7 d- F! ~) F7 V1 i! p. z已经解决，其实我知道是由于过度修饰造成的，因为只有这样的解释更加合理，但是却一直找不到合适的文献作为支撑，所以请教做过实验的人给出直接的原因，现在已经查到相关文献，附上一条$ Y+ K6 V/ j1 t) `

2011-11-25 11:20 上传

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+ p5 i2 ]' v3 ?- I# P来源blood

eley

给你个提示，有很大程度上，Histone是可以被酶降解的~~

274996064

组蛋白的大小和他的修饰是密切相关的，我建议你用抗体做一下  ，  你提的应该没有问题

shiyi

考虑用专门检测acetylation和methylation的抗体做western检测一下，或者把条带切下来做质谱分析。

xujie158

回复 shiyi 的帖子
# s2 i% H3 m! a' s6 M  ~- L" g) r! W% M) H, ?5 g
我查过几篇文献了，结果都是在那个位置，而且都是两条带，现在就是不确定里面具体的原因是什么。

shiyi

Histone有乙酰化（acetylation）和甲基化（methylation）修饰，所以不是一条带而且比根据氨基酸序列计算出来的分子量大，你可以用H1抗体做western确认这两条带是不是H1。