小鼠骨髓间充质干细胞（图）

jyf200383

小弟培养C57小鼠骨髓间充质干细胞已近3个月，结果不满意，基本情况如下：
& n# j2 g* |6 r& ?/ _骨髓冲洗法取小鼠胫腓骨骨髓，全骨髓原代培养，用的是DF12，10%南美血清，48h首次换液，2~3天全量换液，有以下问题想请教各位前辈：
$ O5 t$ w9 ?5 z2 A% z! B1.目前这一批P0第9天，感觉也就50~60%而且与3天前相比似乎没什么太大变化，好像不长了一样（我是每只小鼠，两条后腿的骨髓种在一个25cm瓶里），请教C57 BMSCs的生长周期？2 H! \0 j) t4 [4 B4 E
2.细胞大致呈现两种形态，一种小的（有类圆形，大多为长针型），一种大的（或不规则，或扁长，且此种细胞聚集在一起似伤口结痂般，特别难看），而且两种细胞在生长密集的区域似乎呈复层生长，请教哪种是MSC？或者大细胞是老化的？几代以后会不会变的更纯/均一一些？（因为以前养的几批到P3就不长了，不知道怎么回事）- r" B! J) K7 A" R3 q, ?8 C' P
: i& V7 o: w0 z0 l# G1 ^+ K
PS：图片分别为3瓶细胞两种倍率下的图片

jyf200383

jyf200383

; P3 Z+ W+ [! k: [- }
: k* u! F$ ^0 d) B5 P7 v7 y. X: Y这是那种很奇怪的、很丑的细胞
' Y" r* S2 ]: [" ?4 d

jyf200383

有没有高手帮忙看一下~万分感谢！！

wdx0502

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0 R( X  Q( e* [. ?8 h
& A5 a4 B2 I9 D0 T: x  l感觉细胞不纯，形态的确很怪，应为梭状
& X4 `1 T' R, |$ t# t

lixf

间充质干细胞应该是你所谓的"或不规则，或扁长，且此种细胞聚集在一起似伤口结痂般"，原代的骨髓间充质细胞应该是成集落生长的，其他细胞多为杂细胞，在以后的传代过程中，间充质细胞逐渐纯化，呈长梭形。但是你这张图跟我以前的原代图不大一样，不大明白。

luoziwei

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, @* B) o0 ^" w$ Z
感觉是骨髓吹下来后没注意摇匀，导致局部的细胞极其紧密，细胞空间受到压缩。另外一种，这些细胞看起来像是内皮的表型。

jyf200383

回复 lixf 的帖子6 p- L8 e- u1 h7 M: P# E
! V  K0 v3 b1 f& {: z3 o
谢谢您的回答* z" ~, C& a& e- r- Z" A3 `$ j
您意思是那些难看的细胞（就是下面两张图）是MSC？
9 r. |6 F: N( U# s  W8 o7 |9 m+ y那么传到多少代可以相对比较纯化呢？大约几天传？几比几传？* _5 w1 r5 d9 O8 e
您说的纯化具体怎么纯化呢？就是单纯靠传代么？？9 \$ l  a& e) Q+ U$ N

lixf

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4 Z8 P4 P1 b; B% p8 |2 I
* c9 t! c, t2 A6 I不好意思，我没看见那两张图2 Z- p  Y; O0 R3 t) |, U# x
一般传到3~4代基本上就很纯了  我一般是3~4天传一代，一般1:3传% w( q  D. {; e- E% ?& C$ J
在逐渐的传代过程中杂细胞会越来越少，因此不需要特殊的处理来纯化间充质细胞

jyf200383

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) @! D! _2 @: I3 |
$ n" \' p( e" M3 c: I. o  Q我的细胞最多养到3代就不行了，细胞要么变大变扁，要么就是不长了，您能不能跟我具体说说你的方法呀？？现在实验因为细胞养的不好无法进行下去，特别特别着急，恳求您能不能好心跟我交流交流，好多问题想想请教，我的QQ是283214830，万分感谢！！！！