关于胰酶消化细胞

zdgrp

最近养小鼠ES细胞，每次传代时用0.25%的胰酶消化，胰酶从4°冰箱拿出来后没有37℃预热，在超净台放到室温。感觉有时候消化的太厉害（超过3分钟），有时加培养液终止、吹匀的时候又有些贴壁没消化下来的，请教一下应该如何把握消化的时间？谢谢！

redmaple

我们实验室用的胰酶浓度是0.025%，买的商品化的0.25%的胰酶用pbs-0.5M的EDTA稀释10倍。我们用的是进口的，难道效果好？不同的细胞系，贴壁的程度不同，消化时间也不同，根据实际情况而定，消化之前，胰酶要37度抚育，酶的活性在此温度下最高，利于消化。

mirrida

你试试，没多大影响的！
* W& {, P' Y: t1 l

mansnoopy

首先胰酶需要37度预热，在消化的时候其实不一定需要37度消化，室温其实也没有问题，消化时温和震荡 ，时间不要长，约2min后，在镜下观察即可。

wangfang

用手轻轻敲打培养皿的侧壁

zdgrp

回复 yyshpy 的帖子
- }' ?. R2 O/ c; C- y% E0 E9 T! \# W  V( o9 N" Q! ^  h
嗯，谢谢！！

zdgrp

回复 wangfang 的帖子4 Q8 _7 G9 d% F2 C& t, S

- M# Z9 b% N& Q' \' h5 X; s敲打？怎么个做法？我都是轻轻晃。

receiver1

如果你感觉胰酶消化的太厉害，可能你的胰酶活力很强，可以把胰酶稀释一下再消化。我就是稀释的，根据自己的需要摸索一下浓度。我用的是0.15%的胰酶

wangfang

1先将胰酶放在37度中温热 ，因为胰酶最适作用温度是37度。
; i; z! s5 l' ~2然后将培养皿内的培养液吸出
$ [4 \; \) {8 l2 D3 t3用DOBS清洗，我们只清洗一遍" U5 K7 m8 x& u1 }' w
4加入胰酶，只有完全覆盖住皿底就可以了
% d+ D& w- P* b" e% c! `4 Z; q5放回37度培养箱中，待细胞大部分变圆时轻轻的敲打培养皿使细胞飘起来
, p* c4 j0 q/ {+ J6加入终止液，离心即可。
7 \6 [1 q! k% x7这里面最重要的步骤就是消化时间的掌握和敲打培养皿的力度

xiongjiedeng

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6 @9 ^* O, i8 B1 t
0 o* K( H; |+ P( A呵呵~我用的是10cm培养皿，那就不用那么多，用个400ul足够了