关于胰酶消化细胞

zdgrp

最近养小鼠ES细胞，每次传代时用0.25%的胰酶消化，胰酶从4°冰箱拿出来后没有37℃预热，在超净台放到室温。感觉有时候消化的太厉害（超过3分钟），有时加培养液终止、吹匀的时候又有些贴壁没消化下来的，请教一下应该如何把握消化的时间？谢谢！

redmaple

我们实验室用的胰酶浓度是0.025%，买的商品化的0.25%的胰酶用pbs-0.5M的EDTA稀释10倍。我们用的是进口的，难道效果好？不同的细胞系，贴壁的程度不同，消化时间也不同，根据实际情况而定，消化之前，胰酶要37度抚育，酶的活性在此温度下最高，利于消化。

mirrida

你试试，没多大影响的！' i$ K- k$ N$ d" B- T4 A% ]

mansnoopy

首先胰酶需要37度预热，在消化的时候其实不一定需要37度消化，室温其实也没有问题，消化时温和震荡 ，时间不要长，约2min后，在镜下观察即可。

wangfang

用手轻轻敲打培养皿的侧壁

zdgrp

回复 yyshpy 的帖子  u3 y3 w+ {. u  U# c) L
( t$ v) `. j4 E4 j
嗯，谢谢！！

zdgrp

回复 wangfang 的帖子: R& J) |. u# m% v# r5 I

, e3 r: \* a: [7 c) j% k敲打？怎么个做法？我都是轻轻晃。

receiver1

如果你感觉胰酶消化的太厉害，可能你的胰酶活力很强，可以把胰酶稀释一下再消化。我就是稀释的，根据自己的需要摸索一下浓度。我用的是0.15%的胰酶

wangfang

1先将胰酶放在37度中温热 ，因为胰酶最适作用温度是37度。
$ _/ i" k+ Q2 o+ N2然后将培养皿内的培养液吸出
9 v2 n& e: j' c% u9 ~( e: O3用DOBS清洗，我们只清洗一遍& Q' ?8 G! U3 [0 B. H
4加入胰酶，只有完全覆盖住皿底就可以了; T1 u: [) T/ `* T
5放回37度培养箱中，待细胞大部分变圆时轻轻的敲打培养皿使细胞飘起来3 z7 c) f9 K: ~$ j, n8 I
6加入终止液，离心即可。
# v5 q6 V# q, Z. ]2 y1 i7这里面最重要的步骤就是消化时间的掌握和敲打培养皿的力度

xiongjiedeng

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" ^- m8 g  g6 b* m9 n8 ^呵呵~我用的是10cm培养皿，那就不用那么多，用个400ul足够了