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关于饲养层细胞制作     [复制链接]

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楼主
发表于 2012-3-5 15:51 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
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这两天正忙活小鼠MEF细胞,在 懵懂干细胞 的大力帮助下,终于建立起4批了。但其中有2只老鼠并没有严格按照12.5-14.5天的教科书式的实验步骤,而是请养动物的师傅按照肚子大小来粗略估计的。# {: z$ W: K" |  T+ q* o$ Q0 _+ q

" c. F9 w, H4 C: @0 N有一直孕鼠肚子里的3只胚胎,都非常大了, 胳膊腿都不太好往下拽,后背的皮肤还有点儿硬邦邦的,我还看到白色的类似骨头的东西,消化完了放到培养瓶,8小时之后观察,有很多细胞死的,比发育程度小的胚胎死得多很多,但也有部分细胞贴壁了,也在生长分裂,形态与MEF很相似。9 e" h4 U6 R/ f* Z+ t) U
我有一个问题,为什么必须要12.5-14.5天的,有没有相关的文献,或者前辈们有没有经验,那些用非12.5-14.5天胚鼠建立起来的饲养层细胞,对ips或ES的生长有没有不良的影响?
) K& q6 k; r! m2 [1 ~' [* T: A* E9 K. H" f
补充内容 (2012-3-5 16:18):
. z! O% |% k. V( |/ b9 B还有一个问题,就是MEF经过MMC处理之后停止分裂,会一直贴在哪里不死吗?最后MEF就怎样了? 谢谢!
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补充内容 (2012-3-5 16:18):
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补充内容 (2012-3-5 16:18):8 H, x% |- E+ z0 {* q. w
还有一个问题,就是MEF经过MMC处理之后停止分裂,会一直贴在哪里不死吗?最后MEF就怎样了? 谢谢!
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补充内容 (2012-3-5 16:18):
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沙发
发表于 2012-3-5 16:04 |只看该作者
请问,一只孕鼠怀了多少胎鼠?看胚胎大小,如果不是因为只有3~4个胎鼠的话,感觉至少是14天以上的了... + U8 A+ a5 q5 j3 Y% n. H9 r
还有,LZ进行原代细胞分离都不带个手套么,也不怕污染...
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藤椅
发表于 2012-3-5 16:13 |只看该作者
回复 song58 的帖子1 u* k/ A+ |& B' r" _* S- }
; a* R- [0 ]$ v8 n* I
嘻嘻,从来没带过手套,太贵了。我倒是害怕老鼠不干净~~8 X; k. N/ s3 f% d$ W" Y  ^$ K
我觉得这胚鼠是不小了,这窝就3只
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板凳
发表于 2012-3-5 16:19 |只看该作者
回复 yuhaoze 的帖子5 n9 @% I5 ^9 u" [

& R$ u" G" u5 B7 H' r1 p2 p7 c你们老板连手套都要省啊...太大的胎鼠做成MEF以后感觉细胞状态不太好,长的慢
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报纸
发表于 2012-3-5 16:19 |只看该作者
晕,网不好,点了这么多次

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地板
发表于 2012-3-5 17:51 |只看该作者
第二张图,你那胚胎也太大了,呵呵,感觉再过一两天就快出生了。取13.5天的胚胎做吧(胚胎很小的!如果肉眼看起来困难,可以放体视镜下操作),把头、尾、四肢和内脏(红色的一团)去掉,消化成单细胞接种,平均1胚胎的细胞接种到2个10cm皿,细胞长的很快。13.5天的胚胎,杂细胞最少!
. F- n1 g1 V- M! o8 Q: w& O! F& B5 A# {" ^; J" S$ k. E& b+ w
另外,消化的时候,别消化的太厉害把细胞消化死了,呵呵。其实,MEF很好做的。; q6 V9 i6 f% i8 T
7 F$ t/ m4 j  ~2 d" Y" P  {1 G
戴手套吧,别污染了,就白忙活了,记得加2X双抗。8 X. B1 N& t9 C* ^2 P5 Z# ~
4 n% l, T1 }4 o5 y) ^# C" l: `- ]' p
MMC处理后大约三四天后会慢慢出现死细胞,一周左右大量死亡,但有些细胞能坚持到2周及以后。
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发表于 2012-3-5 18:05 |只看该作者
回复 receiver1 的帖子! B0 w( T9 k0 G5 ?& r0 M( ?7 K. J% o+ D

/ J9 e  O' s8 d% }  R! [- ]! o7 Z谢谢! 过两天MMC来了就处理看看

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发表于 2012-3-5 19:33 |只看该作者
MEF经过MMC处理之后,没有DNA复制能力了,但是怎么会一直在那里不死呢。。。???
/ S9 m# r; I/ \0 o) j' S
( X8 k4 L3 y, _' J( J7 E$ m. M到了衰老的寿命也要死啊。。。。。。一般一个星期内用,3天左右最好。
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发表于 2012-3-5 19:46 |只看该作者
为什么这么强调带手套呢?
7 \( p% a% I" u/ c3 f5 l戴手套就能避免污染了?这毕竟不是主要的。
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发表于 2012-3-5 20:08 |只看该作者
回复 xiangchou812 的帖子
4 w1 k# X% J% z7 t
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