关于饲养层细胞制作

yuhaoze

这两天正忙活小鼠MEF细胞，在 懵懂干细胞 的大力帮助下，终于建立起4批了。但其中有2只老鼠并没有严格按照12.5-14.5天的教科书式的实验步骤，而是请养动物的师傅按照肚子大小来粗略估计的。1 o3 q( ?& s8 _4 s  r$ z

) |2 h3 \) s- ~! B9 a2 n: a7 `有一直孕鼠肚子里的3只胚胎，都非常大了， 胳膊腿都不太好往下拽，后背的皮肤还有点儿硬邦邦的，我还看到白色的类似骨头的东西，消化完了放到培养瓶，8小时之后观察，有很多细胞死的，比发育程度小的胚胎死得多很多，但也有部分细胞贴壁了，也在生长分裂，形态与MEF很相似。
) l: q6 X6 x# b0 [! a我有一个问题，为什么必须要12.5-14.5天的，有没有相关的文献，或者前辈们有没有经验，那些用非12.5-14.5天胚鼠建立起来的饲养层细胞，对ips或ES的生长有没有不良的影响？
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补充内容 (2012-3-5 16:18):
0 |% {! z9 f! ]/ _- Q还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！
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补充内容 (2012-3-5 16:18):( l3 `+ C$ \- O% C8 p& x
还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！' j2 i# N% ^# M. c

, D  O1 I7 |  U& k" T补充内容 (2012-3-5 16:18):
' ?& L" f; N9 C! V- E, v还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！
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补充内容 (2012-3-5 16:18):
+ T* i* t% W# r# I" s还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！
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; b+ N; X8 s: q- K' p4 p补充内容 (2012-3-5 16:18):9 X& d# v- ]7 {; h- F& ~$ G7 l
还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！6 r+ z. s) [2 ~" @

9 g2 t1 X, u7 D, @补充内容 (2012-3-5 16:18):) y4 @" G! K8 x
还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！

song58

请问，一只孕鼠怀了多少胎鼠？看胚胎大小，如果不是因为只有3～4个胎鼠的话，感觉至少是14天以上的了... 8 f  U0 }! X) Q1 q# Y  S
还有，LZ进行原代细胞分离都不带个手套么，也不怕污染...

yuhaoze

回复 song58 的帖子
! @6 k7 {0 j, B5 [) m+ A9 T" }9 d' Y' V1 o  f& @( `( r6 v
嘻嘻，从来没带过手套，太贵了。我倒是害怕老鼠不干净~~' V/ E4 B& |, p/ t2 l' P- W
我觉得这胚鼠是不小了，这窝就3只

song58

回复 yuhaoze 的帖子
* O# {" ?8 y6 g$ E2 C% x9 f$ s, q9 J3 H
你们老板连手套都要省啊...太大的胎鼠做成MEF以后感觉细胞状态不太好，长的慢

yuhaoze

晕，网不好，点了这么多次

receiver1

第二张图，你那胚胎也太大了，呵呵，感觉再过一两天就快出生了。取13.5天的胚胎做吧（胚胎很小的！如果肉眼看起来困难，可以放体视镜下操作），把头、尾、四肢和内脏（红色的一团）去掉，消化成单细胞接种，平均1胚胎的细胞接种到2个10cm皿，细胞长的很快。13.5天的胚胎，杂细胞最少！; w! t5 A4 i$ ]
! k, L' e9 H  ^+ J
另外，消化的时候，别消化的太厉害把细胞消化死了，呵呵。其实，MEF很好做的。7 c: I2 Q( ~4 i" U) e6 `/ W7 u
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戴手套吧，别污染了，就白忙活了，记得加2X双抗。
! Q  V2 Q) D1 O
/ `4 d; o) Q. F2 RMMC处理后大约三四天后会慢慢出现死细胞，一周左右大量死亡，但有些细胞能坚持到2周及以后。

yuhaoze

回复 receiver1 的帖子
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谢谢！ 过两天MMC来了就处理看看

jessewill

MEF经过MMC处理之后，没有DNA复制能力了，但是怎么会一直在那里不死呢。。。？？？' R4 r  i( R- q  z7 C# b5 R. s" R

, L0 X; q! d& f! m& j5 _到了衰老的寿命也要死啊。。。。。。一般一个星期内用，3天左右最好。

xiangchou812

为什么这么强调带手套呢？- V- J/ j) x" q2 E# Z# k) G
戴手套就能避免污染了？这毕竟不是主要的。

yuhaoze

回复 xiangchou812 的帖子
* t3 }) \* Y5 I; z( p( p& v5 q$ |4 p. D1 J0 y
:D:D:D:D