关于饲养层细胞制作

yuhaoze

这两天正忙活小鼠MEF细胞，在 懵懂干细胞 的大力帮助下，终于建立起4批了。但其中有2只老鼠并没有严格按照12.5-14.5天的教科书式的实验步骤，而是请养动物的师傅按照肚子大小来粗略估计的。
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有一直孕鼠肚子里的3只胚胎，都非常大了， 胳膊腿都不太好往下拽，后背的皮肤还有点儿硬邦邦的，我还看到白色的类似骨头的东西，消化完了放到培养瓶，8小时之后观察，有很多细胞死的，比发育程度小的胚胎死得多很多，但也有部分细胞贴壁了，也在生长分裂，形态与MEF很相似。1 j1 l. E$ L/ W" _) V
我有一个问题，为什么必须要12.5-14.5天的，有没有相关的文献，或者前辈们有没有经验，那些用非12.5-14.5天胚鼠建立起来的饲养层细胞，对ips或ES的生长有没有不良的影响？
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% _4 F1 i" h! k# v" k补充内容 (2012-3-5 16:18):
# z/ X; l5 G, h还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！/ ^. o- X; `6 ?$ s) b
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补充内容 (2012-3-5 16:18):8 U% U. F2 Q+ ], P/ S
还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！
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补充内容 (2012-3-5 16:18):
2 D% Z- g5 X+ U+ w5 U  ~还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！9 h4 e9 \/ o  V4 \1 w
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补充内容 (2012-3-5 16:18):8 P/ v2 T7 b& C. B+ ]. B
还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！
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补充内容 (2012-3-5 16:18):
: x) W+ U- v! d9 R& D还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！
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2 g5 H/ z8 z- ^; k, g. j# N" @补充内容 (2012-3-5 16:18):( ]0 m5 x" i3 x$ w, y0 c. V8 E
还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！

song58

请问，一只孕鼠怀了多少胎鼠？看胚胎大小，如果不是因为只有3～4个胎鼠的话，感觉至少是14天以上的了... & \0 j4 D, g4 M: V' |) v4 G7 i
还有，LZ进行原代细胞分离都不带个手套么，也不怕污染...

yuhaoze

回复 song58 的帖子
6 s1 a+ ~! ?/ r* }
7 @$ K6 A. ]" N6 A+ v嘻嘻，从来没带过手套，太贵了。我倒是害怕老鼠不干净~~
9 ?( P" k. s" V5 }) X" B: s: e% o我觉得这胚鼠是不小了，这窝就3只

song58

回复 yuhaoze 的帖子
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9 V5 R/ W$ w3 Q$ _4 @2 t你们老板连手套都要省啊...太大的胎鼠做成MEF以后感觉细胞状态不太好，长的慢

yuhaoze

晕，网不好，点了这么多次

receiver1

第二张图，你那胚胎也太大了，呵呵，感觉再过一两天就快出生了。取13.5天的胚胎做吧（胚胎很小的！如果肉眼看起来困难，可以放体视镜下操作），把头、尾、四肢和内脏（红色的一团）去掉，消化成单细胞接种，平均1胚胎的细胞接种到2个10cm皿，细胞长的很快。13.5天的胚胎，杂细胞最少！
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另外，消化的时候，别消化的太厉害把细胞消化死了，呵呵。其实，MEF很好做的。
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6 ?0 ~7 G! p- U7 `% K* e) {& e. F戴手套吧，别污染了，就白忙活了，记得加2X双抗。1 T- _' Q0 V1 k4 l

* f1 ~' q3 L! O3 Z7 {MMC处理后大约三四天后会慢慢出现死细胞，一周左右大量死亡，但有些细胞能坚持到2周及以后。

yuhaoze

回复 receiver1 的帖子; y+ X$ h- I  c

9 o' s+ [7 B& j4 i; W6 Y' ~4 F谢谢！ 过两天MMC来了就处理看看

jessewill

MEF经过MMC处理之后，没有DNA复制能力了，但是怎么会一直在那里不死呢。。。？？？
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到了衰老的寿命也要死啊。。。。。。一般一个星期内用，3天左右最好。

xiangchou812

为什么这么强调带手套呢？4 S+ u/ T  [; e; b( D1 F
戴手套就能避免污染了？这毕竟不是主要的。

yuhaoze

回复 xiangchou812 的帖子3 B2 c. A1 p5 A
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:D:D:D:D